高效液相色谱法的应用-王伟影.pptVIP

高效液相色谱法的应用 丽水市食品药品检验所 王伟影 2013.08 液相色谱基础知识 液相色谱：以液体作为流动相的色谱分离方法 适用于高沸点、大分子、强极性和热稳定差的化合物的分析 流动相具有运载样品分子和选择分离的双重作用 液相色谱的分离原理 在色谱柱流动相中样品的不同组分与固定相发生吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和等作用，由于作用力的大小、强弱不同，各种组分在固定相中滞留的时间也不同，因而先后从固定相中流出而得到分离。 HPLC的分离类型 正相色谱（NP-HPLC） 反相色谱（RP-HPLC） 反相离子对色谱（RPIC） 离子交换色谱（IEC） 空间排阻色谱（SEC） 手性化合物分离模式（Chiral separation mode） 液相色谱按两相极性不同分为 正相色谱 反相色谱 化合物保留时间随流动相配比的变化而变化 不同极性的化合物出峰顺序 正相色谱 正相：固定相极性 流动相极性 极性官能团键合在载体上，构成极性键合相 1．固定相：硅胶型、氰基型和氨基型（糖类）、二醇基型（蛋白质） 2．流动相：极性小 底剂（弱极性溶剂）+ 有机极性调节剂 例：正己烷 + 氯仿-甲醇，氯仿-乙醇 3．出柱顺序：极性小的组分先出柱，极性大的组分后出柱 4．适用：极性大物质如糖类、蛋白质等 有机相增加，洗