双光子和光谱扫描在激光共聚焦显微镜上的应用经验方案教学教程.pptVIP

双光子和光谱扫描在激光共聚焦显微镜上的应用经验 浙江大学生命科学学院 仪器与技术服务平台 机型：Zeiss LSM710 nlo 32通道阵列PMT 690-1080nm可调谐飞秒激光器 激光共聚焦显微镜的非常规应用 利用双光子分辨目标荧光和自发荧光 利用光谱扫描鉴定微弱荧光信号的真假 转基因材料快速筛选 嘈杂背景下的细胞计数 非线性效应 光刻和深度扫描 模拟近红外光源 GFP标记水稻根中自发荧光的清除 单光子激发，水稻根带有强烈的黄绿色自发荧光 双光子激发，自发荧光为蓝色 ex 488nm，Lambda mode ex 820nm , lambda mode GFP标记水稻根中自发荧光的清除 双光子激发下GFP荧光与自发荧光的波长分离，820nm激发时，仅采集493-542nm区间的信号以保证特异性 Ex 820nm, channel mode 微弱或自发荧光存在下的信号鉴定 Promoter::GFP载体注射烟草叶片（lambda mode成像） 转GFP弱表达 转GFP不表达 镜下目视特征： 绿色信号被强烈红光掩盖 GFP和RFP弱时无法分辨 Lambda合成图特征： GFP：绿色偏蓝 自发荧光：绿色偏黄 叶绿素荧光：红色 光谱特征： GFP： 主发射峰位于约518nm 副发射峰位于约540nm 后者高度约为前者的一半 呈台阶形 自发荧光： 在560nm左右对称分布 叶绿