离子交换法分离植物凝集素黄精.docVIP

植物凝集素的分离纯化及性质测定 实验目的 本实验以黄精为材料，将其粗提液进行过滤和冷冻离心后，再用离子交换层析进行分离。本实验的目的是了解离子交换层析技术的原理，掌握用离子交换层析技术分离蛋白质的基本技术。 实验原理 离子交换层析分离蛋白质的过程，主要是利用蛋白质具有不同的电荷而进行分离。依靠增加缓冲液中的离子强度 或改变ph值使蛋白质带上不同种类和数目的电荷，改变蛋白质与离子交换剂的结合状况，从而使不同的蛋白质得以分离。要成功地分离某种混合物，必须根据其所含物质的解离性质，带电状态选择适当类型的离子交换剂，并控制吸附和洗脱条件(主要是洗脱液的离子强度和ph值)，使混合物中各组分按亲和力大小顺序依次从层析柱中洗脱下来。 试剂与器材 主要试剂：弱碱型阴离子交换琼脂糖凝胶：CM-Sephrose，NaOH, NaCL, Tris，盐酸。乙酸，乙酸钠 主要溶液：生理盐水，0.02mol/Lph4.4的乙酸乙酸钠缓冲液 0.5MolNaOH溶液（含1M的氯化钠）。 主要器材： 离子交换层析柱，储液瓶，梯度洗脱仪，紫外检测仪和记录仪，恒流泵，透析袋。 材料 黄精购于四川省成都市荷花池中药材批发市场，新鲜兔血采自郭家桥农贸市场，4500rpm/min，4°冷冻离心7分钟，倾去上清液，以生理盐水洗涤三次，至上清无色，4°保存备用。 操作步骤 凝胶柱的准备 离子交换剂的制备 CM-阳离子交换剂的