（临床血液学与检验）实验八SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质.ppt

实验八 SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳分离血清蛋白质 一、目的要求 1.学习电泳原理和技术 2.掌握SDS－聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳的工作原理和操作方法 聚丙烯酰胺凝胶是由单体丙烯酰胺(Acr)和交联剂N,N-甲叉双丙烯酰胺(Bis)在加速剂四甲基乙二胺(TEMED)和催化剂过硫酸铵((NH4)2S2O8，AP) 的作用下聚合交联成三维网状结构的凝胶，以此凝胶为支持物的电泳称为聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)。 不连续体系由电极缓冲液、浓缩胶及分离胶所组成。 浓缩胶是大孔胶，凝胶缓冲液为pH6.7 Tris-HC1。分离胶是小孔胶，凝胶缓冲液为pH8.9 Tris-HC1。电极缓冲液是pH8.3 Tris-甘氨酸缓冲液。2种孔径的凝胶、2种缓冲体系、3种pH值使不连续体系形成了凝胶孔径、pH值、缓冲液离子成分的不连续性，这是样品浓缩的主要因素。 样品浓缩效应 (a)凝胶孔径不连续性： (b)缓冲体系离子成分及pH值的不连续性； 在pH6.7的凝胶缓冲体系中 前导离子或快离子：HC1解离出的氯根(C1-) 尾随离子或慢离子：甘氨酸根 mcl?clmp?pmG?G(Cl代表氯根，P代表蛋白质，G代表甘氨酸根)有效迁移率=m?，m为迁移率，?为解离度) 当进入pH8.9的分离胶时，甘氨酸解离度增加，其有效迁移率超过蛋白质； （c)电位梯度的不连续性： 不