通过扩增青霉素生物合成基因簇提高产黄青霉在固态跟液态发酵中的.pptVIP

通过扩增青霉素生物合成基因簇提高产黄青霉在固态和液态发酵中的青霉素产量World J Microbiol Biotechnol (2008) 第二组 材料和方法 产黄青霉Wis54-1255——青霉素低产菌株 产黄青霉Wis54-1255 npe10——其青霉素基因簇不完整 产黄青霉P2-32——青霉素高产菌株 可容纳青霉素基因簇以串联重复的方式扩增数倍 产黄青霉NRRL 1951（野生型）——用作基因文库的DNA源 枯草芽孢杆菌ATCC 6633——用于在生物测定中评估青霉素G的产量 大肠杆菌DH5a——用于粘性质粒基因文库和一般基因操作的受体 基因组文库的构建 基因组文库的筛选 真菌的转化 青霉素在琼脂上的产量 液态发酵 固态发酵 数据分析 对于固态和液态发酵实验，实验结果为两个独立实验的平均值，样品（整个培养瓶或圆柱发酵罐）为一式三份。 对原始和转化菌株的青霉素产量采用Student’s T-test方法进行分析。 结果与讨论 在粘性质粒载体IztapaCos中构建了一个基因组文库，该文库携带有一个腐草霉素抗性基因，且可直接转入真菌之中，不需进一步的亚克隆。 首要目标——分离出一个含有整套青霉素基因簇的粘性质粒克隆。 利用整套基因簇来增加青霉素基因的拷贝数而不是转入单个的pcbAB和pcbC-penDE基因。 为实现这一目标，用分别位于基因簇的两个末端的探针pcbAB