蛋白质1级结构primary structure的测定.pptVIP

蛋白质一级结构（primary structure）的测定 蛋白质测序的发展简史 自从1953 年Sanger首次完成胰岛素的氨基酸顺序测定以来，目前已有很大改进。但是Sanger花费多年时间才基本搞清胰岛素的一级结构，现在由于方法改进及自动化分析仪器的产生，现在已有数百种蛋白质的氨基酸序列问世。 氨基酸序列测定的基本步骤（化学方法） 分析已纯化蛋白质的氨基酸残基组成 测定多肽链的氨基末端和羧基末端 为何种氨基酸 把肽链水解成片段 测定各肽段的氨基酸排列顺序 综合运用多种水解法分析肽段中的氨基酸顺序 测序前的准备工作 要求： 样品纯度：97%以上 相对分子质量：允许误差在10%左右 （一）多肽链的拆分 几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质；可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍或高浓度的盐处理，即可使寡聚蛋白质中的亚基。 如果多肽链间通过共价键（S—S）连接在一起，可采用氧化剂或还原剂将其断裂。 （二）测定蛋白质分子中多肽链的数目 通过测定末端氨基酸残基的摩尔数与蛋白质分子量之间的关系，即可确定多肽链的数目。 （三）二硫键的断裂 几条多肽链通过二硫键交联在一起，可在8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍存在下，用过量的β-巯基乙醇处理，使二