分子生物学5.3 RNA操作与CDNA文库构建.pptVIP

真核生物大多用λ噬菌体、柯斯质粒构建文库，对于一些基因组小的原核生物，可以考虑用质粒构建文库 真核生物基因组文库的构建与原核生物基因组文库的构建有何不同？ 补充内容 4 双链cDNA克隆进质粒或噬菌体载体并导入宿主中繁殖 cDNA末端的处理 由于大片段的平末端连接效率非常低，因此为了避免用平末端与载体连接，对双链cDNA的末端进行加工是十分必要的 方法：添加特异性核酸接头以形成适合于克隆的粘性末端 末端转移酶—可以向cDNA末端加上与克隆载体末端互补的尾部 不讲 5.3.4 cDNA文库的构建 双链cDNA的克隆： 双链平头的cDNA通常可以使用下列三种方法克隆入载体中： 1 平头末端直接与载体连接，但插入的片段无法回收 2 平头两端分别接同聚物尾，最好是AT同聚物尾，这样重组分子可通过加热局部变性和S1核酸酶处理回收插入片段 3 加装人工接头引入酶切口，以便插入片段回收 不讲 基因组DNA文库 cDNA文库 二、基因组DNA文库与cDNA文库的比较 1 基因组DNA文库的优点总结 相对于cDNA文库，基因组文库的优点： cDNA克隆只能反映着mRNA的分子结构，没有包括基因组的间隔序列， cDNA文库中，不同克隆的分布状态总是反映着mRNA的分布状态，即：高丰度mRNA的cDNA克隆，所占比例较高，分离基因容易；低丰度mRNA的cDNA克隆，所占比