黑曲霉生产菌的扩大培养.pptVIP

第七节 黑曲霉生产菌的扩大培养 种子： 将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后，再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养,最终获得一定数量和质量的纯种过程。这些纯种培养物称为种子。 菌种的扩大培养： 从少量的微生物原种开始，经过束带繁殖培养，为每次发酵提供相当数量的健壮的菌种培养物。 1.斜面培养 培养条件： 有利于菌种的繁殖和孢子生长，不产酸，培养基以“多碳少氮”为原则。 蔗糖合成培养基 严格无菌操作 在斜面上划波浪线，尽量利用斜面培养基 2.麸曲三角瓶培养 培养基制备： 新鲜麸皮过筛，按麸皮：水=1：1拌匀，分装1000ml三角瓶，每瓶40g，纱布封口，0.1MPa表压下灭菌40~60min，摇散冷却。35℃培养1d，无气味异常或染菌即可使用。 培养操作： 无菌操作条件下，将2ml斜面菌种的孢子悬浮液，于32℃下培养20h后，白色菌落盖满表面，摇瓶一次，使培养基疏松、铺平，再培养4h，培养基结块，白色菌丝生长旺盛，但未产生孢子，升温到35℃左右，12h摇瓶一次，知道孢子长出后停止。 麸曲可直接作种子罐种子，也可作为二级种子。 3.孢子悬浮液的制备 将符合质量要求的三角瓶麸皮，在无菌操作下，每瓶加入500ml无菌水，摇匀，切勿将棉塞打湿，在火焰下并入接种罐中。 4.种子罐扩大培养 （1）种子罐种子培养基 （2）种子培养条件 ①接种量：随发酵罐容积改变。5000L种子罐接 入20瓶麸曲孢子（70g麸皮/1000ml）。 ②培养温度: 35℃左右 ③供氧：搅拌转速150r/min，通风量 0.3~0.4m3/min。 ④种龄：18~24h （3）种子质量要求 ①镜检：菌丝粗壮，结成菊花状小球体，无异味，无杂菌，无异常菌丝。 ②pH2.0~2.5 ③酸度：0.5%~2.0% ④柠檬酸含量：0.5g/dL左右 二、影响种子质量的因素 1.影响斜面种子质量的因素 （1）培养基 （2）C、N源 C源影响 对糖蜜发酵菌种来说：蔗糖最适宜，麦芽着生孢子糖次之，葡萄糖和乳糖不大适宜。 蔗糖浓度40~80g/L。 N源影响： 对糖蜜发酵，优劣次序：硝酸铵＞硫酸铵＞尿素， 对淀粉质原料，硫酸铵或尿素对产酸影响不大。 （3）培养条件与时间 酸性液体培养6d为佳，固体培养6~8d适宜。 2.影响三角瓶麸曲质量的因素 （1）麸皮的质量 霉烂、虫咬，灭菌困难 营养成分减少，不利于黑曲霉生长 淀粉蛋白质过多，生长旺盛，但孢子着生减少 水分过多，不利于生长 （2）水分 过少易形成干曲，过多影响疏松度，且热量散发不出，一般麸皮：水1：1.1~1.3. （3）培养条件 相对湿度60%~70%，温度35℃左右，经常摇瓶及换气。 3.影响种子罐质量的因素 （1）培养基成分 产酸水平随种子培养基成分的加富而提高。 （2）通风量 对10m3罐 0~6h：0.0185~0.0187 m3/（m3·min） 17~11h：0.03 m3/（m3·min） 12~16h：0.075 m3/（m3·min） 19h后：0.094 m3/（m3·min） 20~24h：0.145~0.15 m3/（m3·min） 24h：0.18 m3/（m3·min） * * 一、菌种的扩大培养 种子的要求： 总量及浓度能满足要求 生理状况稳定 活力强，移种至发酵后，能够迅速生长 无杂菌污染 实验室阶段：不用种子罐，所用的设备为培养箱、摇床等实验室常见设备，在工厂这些培养过程一般都在菌种室完成，因此将其称为实验室阶段的种子培养。 培养基：保证培养基的质量，有利于菌体的生长 减少传代次数 孢子培养时注意湿度，子斜面使用一般不超过1个月 生产车间阶段：种子培养在种子罐里面进行，一般在工厂归发酵车间管理，因此形象地称这些培养过程为生产车间阶段。 培养基：控制成本，驯化；营养比发酵培养基丰富。 种子扩培的两个阶段 *