医学免疫学实验3ELISA双抗体夹心法检测癌胚抗原.pptVIP

实验三 ELISA双抗体夹心法检测癌胚抗原 大学免疫学系 （1）加样：依次加入6个标准品（0、5、10、20、40、80ng/ml）、样品1、样品2，每孔100ul，混匀； （2）温育：37℃，30分钟； （3）洗板：弃去孔内液体，用洗涤液注满各孔，静置10秒，甩干，重复4次后，拍干； （4）加酶：加入酶标抗体，每孔100ul，混匀； （5）温育：37℃，30分钟； （6）洗板：同步骤3 （7）显色：加入显色剂A、B，每孔各一滴，混匀，37℃，15分钟； （8）终止：加入终止液，每孔一滴； （9）测定：30分钟内用酶标仪单波长450nm测定各孔OD值。 免疫酶技术是将抗原抗体反应的特异性与酶的高效催化作用有机结合的一种方法。它以酶作为标记物，与抗体或抗原联结，与相应的抗原或抗体作用后，通过底物的颜色反应作抗原抗体的定性和定量，亦可用于组织中抗原或抗体的定位研究，即酶免疫组织化学技术。 酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)是目前应用最多的免疫酶技术，它是使抗原或抗体吸附于固相载体，使随后进行的抗原抗体反应均在载体表面进行，从而简化了分离步骤，提高了灵敏度，即可检测抗原，也可检测抗体。 ★使单克隆抗体（一抗）结合到某种固相载体（聚苯乙烯）表面，并保持其免疫活性； ★使生物素抗体（二抗）与某种酶连接成酶