免疫学实验二 ELISA(双抗夹心法)1[借鉴].pptVIP

材料和试剂： 1. HBsAg、包被液。 2.待检人血清。 3.酶标记的抗HBsAb抗体。 4.HBsAb阳性对照血清、HBsAb阴性对照血清 5.洗涤液：PH7.4　0.01mol/L PBS-吐温20。 6.底物溶液：OPD-H2O2或TMD-H2O2。 7.终止液：2mol/L H2SO4。 8. 酶标反应板、移液器、恒温箱、酶标仪 酶标板 移液器 酶标仪 * 精品PPT·可编辑借鉴 操作步骤： 包被：将HBsAg用包被液作适当稀释（1：100），在96孔反应板中每孔加100μl，置37℃2h后再移置4℃过夜。 洗涤：将96孔反应板倾去包被液，用洗涤液PBS-吐温20加满各孔，置3min,倾去，如此反复3次。（前两步已完成） * 精品PPT·可编辑借鉴 1.已知抗原包被酶标板 2.1弃去板内包被抗原 2.2拍干 2.3加满洗涤液（重复三次） * 精品PPT·可编辑借鉴 3.加样 （1）阳性对照：第1、2孔加HBsAb阳性对照血清50μl； （2）阴性对照：第3、4孔加HBsAb阴性对照血清50μl； （3）空白对照：第5孔加生理盐水100μl； （4）余下各孔加待检血清50μl。 * 精品PPT·可编辑借鉴 加酶标记的抗HBsAb抗体：除空白对照外各孔50μl，充分混匀。将即时帖覆盖于反应板上，37℃孵育30min。 弃去反应孔内液体，拍干，用洗涤液注满各孔、静置30秒、再拍干，重复洗涤5 次。(操作同2) 显色：各孔（包括空白对照）加底物A液50μl（1滴），底物B液50μl（1滴），置37℃避光温育15min。 终止反应：各孔加终止液50μl （2mol/L H2SO4 ）。 比色：将反应板以酶标仪450nm处用空白孔调零，测各孔OD值。 * 精品PPT·可编辑借鉴 6.显色 各孔（包括空白对照）加底物A液50μl（1滴），底物B液50μl（1滴），置37℃避光温育15min 7.终止反应 各孔加终止液50μl （2mol/L H2SO4 ） * 精品PPT·可编辑借鉴 OPD（邻苯二胺）经酶作用后的显色反应 终止前　　终止后 TMB四甲基联苯胺经酶作用后的显色反应 终止前　　终止后 * 精品PPT·可编辑借鉴 结果判断： 计算：判断值＝阴性对照平均OD值×2.1 结果判断：待测样品孔OD值大于或等于判断值为阳性； 　　　　　　小于判断值为阴性。 注：阴性对照OD值小于0.05按0.05计算， 　　大于0.05按实际OD值计算判断值。 * 精品PPT·可编辑借鉴 注意事项： 试剂及待测标本使用前应平衡至室温，并将试剂混匀，弃去1～2滴垂直滴加； 严格按照操作程序依次加样，以保证实验结果准确性； 应尽量避免孔中有气泡，以免所测得OD值不准确。 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 * 精品PPT·可编辑借鉴 精品PPT·可编辑借鉴 配色花哨 文字多 套用模板 套用模板 逻辑不清 内容空洞 太土 太杂 太乱 太繁 “ ” 精品PPT·实用可编辑 实验二、酶联免疫吸附试验 实验内容： 间接法 　－－－测乙型肝炎病毒表面抗体（HBsAb） Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA * 精品PPT·可编辑借鉴 　　酶联免疫吸附试验（ELISA）是将抗原、抗体的特异性反应与酶对底物的高效催化作用相结合的一种敏感性很高的实验技术，可用于检测体液