溴化乙啶细胞端粒酶活性TRAP电泳分析试剂盒产品说明书.docVIP

PAGE PAGE 1 溴化乙啶细胞端粒酶活性TRAP电泳分析试剂盒产品说明书（中文版） 主要用途 溴化乙啶细胞端粒酶活性TRAP电泳分析试剂是一种旨在通过端粒酶体外合成端粒重复序列的引物延展方法，继而进行多聚酶联扩增反应，在非变性聚丙烯酰胺电泳上，通过经典的溴化乙啶染色技术，呈现六碱基相间的阶梯图像，以分析和评价活细胞端粒酶活性的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。广泛应用于肿瘤、衰老等研究。产品即到即用，性能稳定，无核酶污染，操作便捷，敏感高效，染色清晰，重复性好。 技术背景 端粒重复序列扩增方法（telomeric repeat amplification protocol；TRAP）是基于多聚酶联扩增的敏感高效的体外端粒酶活性的检测技术。首先，非端粒单核苷酸引物作为端粒酶的底物而持续延长产生六碱基差异的片段；然后，延长所获得的产物在非端粒单核苷酸引物和逆向引物的参与下进行特异性扩增；内参引物的整合用于定量酶活性。溴化乙啶染色技术可以检测到10ng的DNA条带。 产品内容 清理液（Reagent A） 毫升 裂解液（Reagent B） 毫升 反应液（Reagent C） 毫升 上样液（Reagent D） 微升 胶底液（Reagent E） 毫升 凝结液（Reagent F） 毫升 促进液（Reagent G） 微升 胶体液（Reagent H） 毫升 电泳液（Reagent I） 毫升 染色液（Reagent J） 微升 产品说明书 1份 保存方式 保存 清理液（Reagent A）、 裂解液（Reagent B）、 反应液（Reagent C）和 凝结液（Reagent F）在－20℃冰箱里， 上样液（Reagent D） 促进液（Reagent G）和 染色液（Reagent J）保存在4℃冰箱里；其余的保存在室温下。 上样液（Reagent D）、 胶底液（Reagent E）、 促进液（Reagent G）、 胶体液（Reagent H）和 染色液（Reagent J），避免光照，有效保证6月 用户自备 无离子水：用于稀释 电泳液（Reagent I）和 染色液（Reagent J） 1.5毫升离心管：用于细胞裂解的容器 0.5毫升PCR管：用于扩增反应的容器 15毫升锥形离心管：用于胶体溶液配制的容器 50毫升锥形离心管：用于胶体溶液配制和溶液混匀的容器 细胞刮脱棒：用于细胞脱落 PCR仪：用于扩增反应物 微型台式离心机：用于样品操作 电泳仪：用于TRAP分子电泳分离 平式摇荡仪：用于染色反应 染色塑料盒：用于PAGE凝胶染色的容器 UV自动成像仪或PHOSPHORIMAGE：用于电泳染色记录 实验步骤 样品制备 准备1个细胞培养6孔板的单孔细胞，直至生长至80％铺满率（1 X 105细胞） 小心抽去细胞培养液 加入xx毫升 清理液（Reagent A）覆盖生长表面 小心抽去清理液 用细胞刮脱棒刮落细胞转移到1.5毫升离心管 放进微型台式离心机离心5分钟，速度为3000g（或6000RPM，例如eppendorf 5415） 小心抽去上清液 小心加入xx微升预冷的 裂解液（Reagent B），混匀细胞颗粒群 放进冰槽里孵育30分钟 即刻放进－70℃冰箱里保存或置于冰槽里备用 扩增反应 准备2个0.5毫升PCR管，置于冰槽里 按照下表依次加入反应物 内容物 样品管 阴性对照管 反应液（Reagent C） xx微升 xx微升 细胞裂解悬液样品 xx微升（6微克细胞总蛋白） ―― 裂解液（Reagent B） ―― xx微升 总量 xx微升 xx微升 混匀 室温下（30℃）孵育30分钟 即刻放进PCR仪，按照下表扩增 反应温度（℃） 反应时间 反应循环 94 90秒 1 94 30秒 28 60 30秒 分别加入xx微升 上样液（Reagent D） 置入冰槽里等待上样 垂直电泳分析 移出xx毫升 胶底液（Reagent E）到15毫升锥形离心管里 加入xx微升 凝结液（Reagent F） 加入xx微升 促进液（Reagent G） 混匀后，即刻移入玻璃槽，避免气泡 在室温下孵育45分钟，或直至胶体凝结 移出xx毫升 胶体液（Reagent H）到50毫升锥形离心管里 加入xx微升 凝结液（Reagent F） 加入xx微升 促进液（Reagent G） 混匀后，即刻移入玻璃槽，避免气