T∕CACM 1027.105-2018 白及快速PCR鉴定.docx

ICS11.100

C23

团体标

准

T/CACM1027.105—2018

白及快速PCR鉴定

QuicklyPCRidentificationofRhizomaBletillae

2018-11-19发布

2018-11-19实施

中华中医药学会发布

I

T/CACM1027.105—2018

目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4方案 2

5仪器设备使用要求 2

5.1总体要求 2

5.2仪器设备要求 2

6试剂和溶液配制 3

6.1总体要求 3

6.2试剂和溶液配制要求 3

7检验程序 4

7.1要求 4

7.1程序 4

8结果判定 6

9结果报告 6

9.1一般要求 6

9.2鉴定报告 6

10质量保证 7

11废弃物处理 7

附录A（资料性附录）白及快速PCR鉴定体系的建立 8

II

T/CACM1027.105—2018

前言

本标准按照GB/T1.1《标准化工作导则第1部分：标准的结构和编写》给出的规则起草。请注意本文件的某些内容有可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。

本标准由中华中医药学会提出并归口。

本标准主要起草单位：贵阳中医学院，中国中医科学院中药资源中心，广东省药品检验所。本标准主要起草人：周涛，袁媛，黄璐琦，杨志业，赵丹，蒋超，赵玉洋，周骏辉。

1

T/CACM1027.105—2018

白及快速PCR鉴定

1范围

本标准规定了白及快速PCR鉴定的方案、仪器设备使用要求、试剂和溶液配制、检验程序、结果判定、结果报告、质量保证和废弃物处理的要求。

本标准适用于白及药材、饮片、种子和种苗鉴定。

2规范性引用文件

下列文件对本标准的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

《中华人民共和国药典》（2015年版一部和四部）

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

白及BletillaeRhizoma

兰科植物白及的干燥块茎（参见附录A）。

3.2

检验样品testsample

按一定规则取自某一整体，能反映该整体的相关信息，可以作为判断该整体情况的一个或多个部分。

3.3

DNA提取DNAextraction

从样品中提取出DNA的方法。

3.4

DNA扩增DNAamplification

通过一定技术使一段特定的DNA片段拷贝数增加的过程。

注：可通过聚合酶链式反应技术实现DNA扩增。

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3.5

聚合酶链式反应（PCR）polymerasechainreaction

一种用于扩增特定DNA片段的分子生物学技术，即DNA片段的特异性体外扩增过程，其特异性依赖于与目的DNA片段两端互补的寡核苷酸引物。

3.6

阳性对照positivecontrol

使用对照样品代替检验样品同法DNA提取、靶核酸扩增和产物检测过程，用于证明鉴定过程可获得目标核酸片段的操作。

3.7

阴性对照negativecontrol

使用常见伪品药材代替检验样品同法DNA提取、靶核酸扩增和产物检测过程，用于确认检测系统能够满足白及鉴别的操作。

3.8

空白对照blankcontrol

以水代替检验样品同法DNA提取、靶核酸扩增和产物检测过程，用以证明提取过程中没有核酸污染的操作。

4方案

白及快速PCR鉴定应采用抽取有代表性的检验样品与对照样品比较的验证方式，即依据白及特异性DNA位点差异，使用SNP（单核苷酸多态性）标记法进行鉴定。利用碱裂解法提取白及DNA，以白及DNA为模板进行PCR扩增，采用荧光检测或琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物。

5仪器设备使用要求

5.1总体要求

所有制备样品使用的器具在使用前应进行灭菌处理。

5.2仪器设备要求

5.2.1PCR仪

使用前应进行温度校准。

5.2.2手持式紫外灯

能发出波长为365nm的紫外光。

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5.2.3连续可调微量移液枪

应包括0.1μL～2.5μL、0.5μL～10.0μL、10μL～100μL、100μL～1000μL规格，并包括配套的