布鲁氏菌试管凝集试验.ppt

抗原抗体结合的适当比例抗原是多价的(分子表面有多个抗原决定簇)，抗体一般是双价的，(分子的末端有两个抗原结合部位)，所以，二者的结合就有一个比例关系问题．只有抗原抗体比例适当，才能形成较大的，容易观察的复合物．如若比例不当,就不能形成较大复合物.所以试验时要根据不同情况对抗原抗体(甚至两者同时)进行连续稀释,以便更好地提供两者最适的比例.颗粒性抗原,因其分子较大,形成可见的凝集物质所需的抗体较少,所以试验时一般把含有抗体的血清做连续稀释,尽管如此,有时还能在含有较多抗体的前列试管中,因两者比例不当不呈现可见反应,这种现象被称为前带现象.第31页,共35页，2024年2月25日，星期天

抗原抗体结合的阶段性

抗原抗体的结合分为两个阶段

第一阶段:特异性结合阶段,反应快,只需几秒或几分即可完成.但不出现肉眼可见的反应.

第二阶段:抗原抗体结合的可见阶段,这一阶段的反应是可见的,反应较慢,常需几分钟，几十分钟或更久。第32页,共35页，2024年2月25日，星期天抗原抗体反应的影响因素电解质；抗原抗体反应必须有适量的电解质参加，否则不出现可见反应，一般拿0.85化钠溶液做为抗原或抗体的稀释液。温度：适当提高温度可以增多抗原与抗体的碰撞机会。促进反应现象加速出现。一般最适温度范围在0-56之间。在这个范围内，温度低，对反应的促进作用较小，但生成的复合物不易解离。温度高，对反应的促进作用较大，但生成的复合物容易解离。实际工作中，多数反应在37进行。在试验过程中，一般在加温之前，适度的振摇抗原抗体的混合液，也能增加两者之间的碰撞机会。酸碱度：一般以6.0-8.0为宜，若低至3左右，因接近细菌的等电点，可引起细菌性抗原非特异性的酸凝集，影响试验结果。第33页,共35页，2024年2月25日，星期天血清学试验的对照由于参加血清学试验的成分和试验过程中可能出现的影响因素很多，所以需要在正式试验的同时，在与正式试验完全一致的条件下分别对抗原，抗体等各种成分做对照检查。这些对照检查和对照试验对观察和分析试验结果是绝对必要的。另外，诊断制品一定要在有效期内使用。第34页,共35页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第35页,共35页，2024年2月25日，星期天关于布鲁氏菌试管凝集试验

免疫学基础

第2页,共35页，2024年2月25日，星期天由于布鲁氏菌培养的营养条件苛刻而且时间长，所以布鲁氏菌的血清学诊断越来越受到重视。第3页,共35页，2024年2月25日，星期天主要是根据相应抗原抗体可以在体外发生特异性结合并呈现可见反应的原理,用已知抗原(或抗体)检测体液中未知的抗体(或抗原).由于试验时通常是用患者血清作为待检材料,所以检测抗原抗体的体外试验又称为血清学试验或血清学反应.第4页,共35页，2024年2月25日，星期天血清学检查既可协助早期诊断，还可确定是否复发或重复感染。感染1-2周后，患者血清中出现IgM抗体，可以用凝集试验或抗人球蛋白试验检测．感染３周后，患者血清中出现IgG抗体，可以用补体结合试验，荧光抗体或ELISA检测．第5页,共35页，2024年2月25日，星期天虎红平板的凝集反应（RBPT）第6页,共35页，2024年2月25日，星期天原理该试验又称为班氏孟加拉红平板凝集试验。由于所用的抗原是酸性（PH3.6—3.9）带色的抗原，该抗原与被检血清作用时能抑制血清中的IgM类抗体的凝集活性、检查出的抗体是IgG类，因此提高了该项反应的特异性。第7页,共35页，2024年2月25日，星期天器材与试剂虎红平板凝集抗原、被检血清、清洁脱脂玻片或有凹形孔的玻片、0.1ml吸管或微量加样器、混合棒或牙签第8页,共35页，2024年2月25日，星期天试验方法在玻片上加0.03ml被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03ml，充分混匀，在5分钟内观察结果。第9页,共35页，2024年2月25日，星期天(四)结果判定有二种方法，第一种是，出现可见的凝集反应就判为阳性；另一种用“+”表示凝集程度按下列标准用加号记录反应强度：++++：出现大的凝聚片或小的粒状物，液体完全透明，100%凝集+++：有明显的凝聚片，液体几乎完全透明，75%凝集++：有可见的凝集片，液体不甚透明，50%凝集+：液体混浊，只有少量粒状物，25%凝集-：液体均匀混浊第10页,共35页，2024年2月25日，星期天评价此法简便、快速、容易操作，适于基