实验五血浆凝固酶实验与肥达实验.ppt

目录末页关于实验五血浆凝固酶实验与肥达实验目录一血浆凝固酶实验二、肥达氏反应实验第2页,共17页，2024年2月25日，星期天熟悉血浆凝固酶试验的意义。目的：一血浆凝固酶实验材料：菌种：金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌其他：新鲜兔血浆(或人血浆)、NS等第3页,共17页，2024年2月25日，星期天纤维蛋白原+血浆凝固酶不溶性纤维蛋白玻片法原理：一血浆凝固酶实验细菌形成凝块黏附于细菌第4页,共17页，2024年2月25日，星期天充分混合，观察结果。结果：阳性——无法混匀，细菌在血浆中聚集成团块；阴性——呈均匀混浊；血浆+NS+细菌1血浆+NS+细菌2方法：一血浆凝固酶实验金黄色葡萄球菌表皮葡萄球菌意义：鉴定致病性与非致病性葡萄球菌。第5页,共17页，2024年2月25日，星期天目的：二、肥达氏反应实验1、掌握肥达试验的原理，操作方法及结果判断。2、熟悉其临床意义。第6页,共17页，2024年2月25日，星期天一、肥达氏反应实验材料：1．标本感染待测血清（稀释度1：20）。2．试剂伤寒沙门菌菌体抗原（O）及鞭毛抗原（H）、甲型副伤寒沙门菌鞭毛抗原及乙型副伤寒沙门菌鞭毛抗原。3．其他微孔反应板、50μl移液器、吸头、水浴箱等。第7页,共17页，2024年2月25日，星期天原理：一、肥达氏反应实验第8页,共17页，2024年2月25日，星期天（1）在微孔反应板编号4排6列。（2）每孔加入生理盐水50μl。（3）吸取待检血清50μl加入每排第1孔，连续倍比稀释到第5孔。从第5孔吸出50μl弃去。第6孔为对照管。这样每排从第1孔至第5孔的血清稀释度为1：40,1：80,1：160，1：320,1：640。（4）每排每孔加入对应的伤寒菌液50μl。（5）混匀，置于52℃水浴箱中1h后观察。方法：二、肥达氏反应实验第9页,共17页，2024年2月25日，星期天50实验方法5050505050505050501:401:801:1601:3201:64050弃掉1234550650NS(μl)待测血清对照管50505050①②③④灭活的伤寒菌液50μl50μl50μl50μl50μl50μl抗体稀释度彻底混匀52℃,1h二、肥达氏反应实验第10页,共17页，2024年2月25日，星期天结果：先观察对照管，应无凝集现象。“++++”—细菌全部凝集，液体清澈，孔底形成大片凝集物。“+++”—细菌大部分凝集，液体澄清，孔底明显凝集物。“++”—细菌部分凝集，液体半澄清，孔底有明显凝集物“+”—少量细菌凝集，液体较混浊，孔底少量凝集物。“-”—液体混浊，细菌无凝集。与对照孔相同。二、肥达氏反应实验第11页,共17页，2024年2月25日，星期天效价（滴度）的判定：产生明显凝集反应（++）的最高血清稀释度为血清中所测抗体的效价。效价愈高，表示血清中所含该抗体愈多。如血清的最低稀释度仍无凝集，或血清效价低于1：80，则为阴性，应报“1：80”；如果血清的最高稀释度1：1280仍呈“++”或更强凝集，则血清效价应报“1：1280”。二、肥达氏反应实验第12页,共17页，2024年2月25日，星期天实验预期结果+很小的凝集颗粒混浊-无凝集现象与对照相同++小、部分凝集块中等混浊+++大多凝集管底轻度混浊++++大的凝集块清亮凝集程度沉淀上清第13页,共17页，2024年2月25日，星期天H与O抗体的性质及其消长意义预防接种；非特异性回忆反应感染早期、其他沙门菌引起的交叉反应患肠热症可能性大高低高出现较晚，维持时间长IgGH抗体低高高出现较早，维持时间短IgMO抗体体内出现情况体内出现情况抗体类型第14页,共17页，2024年2月25日，星期天管底沉淀凝集程度最高稀释比例待测血清的滴度效价第15页,共17页，2024年2月25日，星期天思考题1