基因功能研究常用方法.ppt

（三）表型克隆定义:建立在表型的基础上,对特定致病基因DNA片断的直接克隆.从疾病的表型出发,直接对产生变异的DNA片断进行克隆,而不依赖基因的染色体位置或基因产物的信息.如:代表性差异分析(RDA技术)p285第64页,共66页，2024年2月25日，星期天人类基因组计划与疾病相关基因克隆当致病基因的染色体定位确认后，人们可以利用因特网上的基因网站(NCBI)所提供基因序列数据，鉴定出候选致病基因。利用基因组数据库,通过同源序列比较与分析(BLAST),在计算机上就可以进行疾病相关基因或新基因的拼接克隆,甚至不需要传统意义的实验操作第65页,共66页，2024年2月25日，星期天感谢大家观看第66页,共66页，2024年2月25日，星期天**************转基因的技术方法DNA显微注射法克隆法胚胎干细胞技术逆转录病毒介导的基因转移精子载体法等各有优点和缺点，常用的是显微注射和克隆法第32页,共66页，2024年2月25日，星期天转基因动物的鉴定Southern杂交确定外源基因的整合以及整合的拷贝数RT-PCR确定外源基因的转录和转录水平Western杂交确定外源基因蛋白质的表达情况实时PCR（荧光定量PCR）第33页,共66页，2024年2月25日，星期天转基因技术的应用（1）建立致病基因表达、调控的动物模型（2）动植物新品种的培育（3）各种基因工程产品的制备（4）探讨生殖细胞的基因治疗方法第34页,共66页，2024年2月25日，星期天????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????囊性纤维变性是一种遗传病，患者体内会产生粘稠的粘液，阻塞肺部、胰腺和消化器官的内部通道，大约有一半的患者活不过31岁。英国PPT公司培育了植入人体基因的克隆羊，羊奶中含有能够治疗囊性纤维变性的人体蛋白。维尔莫特所在的研究所曾向德国一家药厂出售一头这样的转基因羊，获得50万英镑。第35页,共66页，2024年2月25日，星期天核转移技术即动物整体克隆技术，将动物体细胞核全部导入另一个体的去胞核的受精卵内，使之发育成个体，即克隆(clone)。这样的个体所携带的性状仅来自一个父亲或母亲个体,为无性繁殖.1996年,克隆羊”多莉”的产生成为当年分子生物学发展最重要的事件二、核转移技术第36页,共66页，2024年2月25日，星期天???????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????????克隆羊“多利”第37页,共66页，2024年2月25日，星期天第38页,共66页，2024年2月25日，星期天基因剔除技术也称基因靶向(genetargeting)灭活，有目的去除动物体内某种基因的技术。第三节、基因剔除技术第39页,共66页，2024年2月25日，星期天基因剔除程序将灭活的基因放入胚胎干细胞(ES细胞),使这一灭活的基因通过同源重组取代原有目的基因,筛选到基因定点灭活的细胞后,通过显微注射到小鼠囊胚.细胞在小鼠囊胚参与胚胎的发育,最终形成嵌合体小鼠,由于一部分生殖细胞来源于ES细胞,通过小鼠培养可获得纯合子基因剔除小鼠.第40页,共66页，2024年2月25日，星期天基因转移和基因剔除技术在

医学中的应用建立动物疾病可遗传的模型,探讨疾病发生机制①单基因决定疾病模型进行基因剔除以模拟基因失活.单基因疾病模型:地中海贫血,动脉硬化,老年痴呆等②多基因决定疾病模型多基因疾病模型:肿瘤,高血压,糖尿病第41页,共66页，2024年2月25日，星期天第四节基因沉默技术第42页,共66页，2024年2月25日，星期天基因沉默技术反义(antisen)技术RNA干涉(RNAInterference,RNAi)第43页,共66页，2024年2月25日，