羊传染性脓疱病诊断技术规范.pdf

羊传染性脓疱病诊断技术规范

1范围

本文件提出了羊传染性脓疱病的临床诊断、病毒分离培养、分子生物学诊断技术要求。

本文件适用于羊传染性脓疱病的诊断。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

GB/T27401-2008实验室质量控制规范动物检疫

NY/T3235-2018羊传染性脓疱诊断技术

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1羊传染性脓疱病

羊传染性脓疱病亦称羊口疮、羊传染性脓疱皮炎、羊传染性脓疱口炎，是由羊传染性脓疱病毒导致

的山羊、绵羊接触性、嗜上皮性传染病。

3.2PCR

聚合酶链式反应，英文全称PolymeraseChainReaction，缩写为PCR，由引物选择性体外扩增DNA或

RNA片段的检测方法。

3.3ddHO

2

双蒸水，是重蒸水的一种，是将经过一次蒸馏后的水再次蒸馏所得到的水。

3.4PCRMasterMix

PCR预混液。

3.5DNAMarker

特定分子量大小的DNA片段混合物，用于估算样品DNA分子量的大小。

3.6荧光定量PCR探针法

1

除了引物外另外设置一个探针，在探针的两端分别带上发光基团和淬灭基团，此时，两个基团平衡

不发光；当DNA通过引物合成时，探针被折断，释放出发光基团和淬灭基团，两个距离较远，发光基团

产生荧光，被机器收集到信号，从而检测基因的量。

3.7Ct值

每个反应管内的荧光信号量达到设定的阈值所经历的循环数。

4生物安全措施

样品采集的生物安全按GB/T27401-2008的规定执行。

样品处理的生物安全措施按GB19489-2008的规定执行。

5临床诊断

5.1流行病学

绵羊和山羊均易感，各年龄段的羊均可发病，以1月龄～6月龄多发，成年羊呈散发。除能感染羊外，

该病毒对其他反刍动物和人类也具有感染能力。

一年四季均可发病，常呈群发性流行。自然放牧条件下，冬春季节多发。

病羊是该病的主要传染源，受到污染的圈舍、栏杆、垫草、饲槽以及饲草等都存在病毒，可经皮肤

黏膜损伤处感染其他羊。

5.2临床症状

5.2.1唇型

唇型的临床症状及病理变化表现为在上唇、鼻镜、口角等部位出现小红疹，逐渐演变为小结节和疣

状，最后破溃形成硬痂，参见附录A.1。

5.2.2蹄型

蹄型多见于绵羊，常表现为一肢患病，其临床症状及病理变化表现为蹄叉、蹄冠、系部皮肤出现水

疱、脓疱，破溃后形成溃疡，参见附录A.2。

5.2.3外阴型

外阴型较少见，母羊临床特征及病理变化主要表现为有脓性或黏性阴道分泌物，阴唇及周围皮肤有

溃疡，参见附录A.3；公羊出现阴鞘肿胀、脓疱、溃疡。

5.2.4乳房型

乳房型乳头和乳房皮肤有脓疱、痂垢，参见附录A.4。

5.2.5其他类型

体表皮肤感染临床症状与病理变化与唇型相似。小肠和肠系膜感染其临床特征及病理变化主要表现

为体温升高（高于39.5℃）、精神萎靡、腹腔积液，小肠浆膜表面出现黄白色溃疡灶，肠系膜上出现大

小不一的圆形或椭圆形脓疱，参见附录A.5。

2

5.3结果判断

符合5.1、5.2，可判定为羊传染性脓疱病疑似病例。

6病毒分离培养

6.1病料采集和处理

6.1.1痂皮

采集发病羊患处痂块0.5g～1.0g，用无菌生理盐水漂洗3次后剪碎，研磨并以无菌生理盐水按1:

10制成悬液，加青霉素、链霉素各2000IU/mL，置4℃冰箱过夜，3000r/min、离心l0min，取上清，-20

℃保存，备用。

6.1.2水泡液

用无菌注射器抽取丘疹水泡液，置于含2倍体积无菌生理盐水中的灭菌离心管中，加青霉素、链霉

素各2000IU/mL，3000r/min离心l0min