培养基成分及培养基的配制.ppt

培养基母液及培养基的配制培养基母液及培养基的配制一、知识点1.了解培养基的成分及配制方法；2.掌握母液存储方法；二、技能点1.掌握母液及培养基的配制方法；一、培养基的成分水无机盐：大量元素（＞0.5mmol／L）微量元素（＜0.5mmol／L）有机物：碳源（常用蔗糖）、维生素类、肌醇、氨基酸、天然复合物植物生长调节物质：生长素类（IAA、NAA、2,4-D）、细胞分裂素、赤霉素(GA)培养基的其他成分：琼脂（用量6～10g／L）、活性炭1、水配制培养基母液时要用蒸馏水，以确保母液及培养基成分的精确性，防止贮藏过程发霉变质，大规模生产时可用自来水。但在少量研究上尽量用蒸馏水，以防成分的变化引起不良效果。2、无机盐(1)大量元素：指浓度大于0.5mmol／L的元素，有C，H，O，N，P，S，K，Ca，Mg等。(2)微量元素：指浓度小于0.5mmol／L的元素，有Fe，Mn，Zn，Cu，B，Mo，Co，I等。3、有机物（1）碳源一般添加蔗糖、葡萄糖和果糖，其中蔗糖最为常用。（2）维生素类在植物组织培养中通常以B族维生素为主，一般用量为0.1~1.0mg/L，常用的维生素有盐酸硫胺素（Vit.B1）、盐酸吡哆素（Vit.B6）、Vit.B12、烟酸、生物素及维生素C。（3）肌醇使用浓度一般为100mg/L，适当使用肌醇，能促进愈伤组织的生长以及胚状体和芽的形成。对组织和细胞的繁殖和分化有促进作用，对细胞壁的形成也有作用。（4）氨基酸常用的有甘氨酸、精氨酸、谷氨酸、古酰胺、天冬酰胺、丙氨酸等。（5）天然复合物如椰乳10%或100~150ml/L，酵母提取物0.5%，番茄汁5%~10%，香蕉泥100~200mg/L4、生长调节物质（1）生长素类：可诱导愈伤组织形成、胚状体产生、试管苗生根及诱导腋芽、不定芽产生(配合细胞分裂素)。有IAA、NAA、IBA、2,4-D。（2）细胞分裂素：可诱导芽的分化促进侧芽萌发生长、促进细胞分裂与扩大、抑制根的分化。有激动素（KT）、6-苄基腺嘌呤（6-BA）、玉米素（ZT）等。（3）赤霉素(GA)：常用的是GA3。不耐热，高压灭菌后将有70％～100％失效，应当过滤灭菌。5、培养基的其他成分（1）琼脂在固体培养中作为固化剂，能溶解在90℃以上热水中，用量在6～10g／L之间。（2）活性炭防止褐化；促进生根；降低玻璃苗的产生频率二、培养基类型培养基类型：MS培养基、B5培养基、N6培养基等根据培养材料的种类、有针对性地选择适宜的培养基三、母液的配制为了提高工作效率，以及减少用量极少的物质的称量误差，我们通常在培养基配制前先进行母液的配制。母液是将培养基成分扩大若干倍，一般为10倍、20倍、100倍、1000倍。按照培养基配方，把各类母液中各种药品分别称量、分别溶解、低温保存，配制培养基时再按比例吸取即可。（1）母液配制流程MS培养基配方例：铁盐母液的配制称取（FeSO4.7H2O、Na2-EDTA）→分别加水使全部溶解→定容至500ml→倒入棕色试剂瓶→贴上标签→保存于冰箱药品名称规定用量mg/L扩大倍数称取量mg母液定容体积mlFeSO4.7H2O27.81001390500Na2-EDTA37.31001865标签上注明母液名称、配制倍数与日期例：1mg/mLNAA的配制配制前需先用相应的少量有机溶剂进行溶解，然后再定容。用分析天平称取NAA100mg→加入少量乙醇或1mol/LNaOH助溶→定容至100ml。三、培养基的配制1、按配方称量蔗糖、卡拉胶→移取母液（大量元素、微量元素、铁盐、有机物、植物生长调节剂）→加热水搅拌、定容→调PH→分装→灭菌（121℃20~30分钟）。2、培养基分装量为每瓶的1/5~1/4.（2）培养基灭菌:24h内完成,121℃保持20分钟左右部分工作流程图片称量琼脂、蔗糖等移取母液计算母液（1）称量要精确、选择合适的称量天平。（2）配制母液时要注意药品溶解的先后顺序，以免发生化学反应，产生沉淀；（3）母液贴好标签