2017100821651一种以多肽修饰的氨基树脂为载体的固定化酶及制备方法.pdfVIP

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN106701729B

(45)授权公告日2019.12.17

(21)申请号201710082165.1(56)对比文件

(22)申请日2017.02.15CN103074322A,2013.05.01,

CN106222157A,2016.12.14,

(65)同一申请的已公布的文献号

CN102839166A,2012.12.26,

申请公布号CN106701729A

审查员徐浩

(43)申请公布日2017.05.24

(73)专利权人南京工业大学

地址211816江苏省南京市浦口区浦珠南

路30号

(72)发明人朱颐申李胜卫姚忠屠春燕

张凡

(74)专利代理机构江苏致邦律师事务所32230

代理人徐蓓尹妍

(51)Int.Cl.

C12N11/08(2006.01)

C12N9/20(2006.01)权利要求书1页说明书5页附图3页

(54)发明名称

一种以多肽修饰的氨基树脂为载体的固定

化酶及制备方法

(57)摘要

本发明涉及一种以多肽修饰的氨基树脂为

载体的固定化酶及制备方法，固定化酶载体采用

多肽修饰的氨基树脂，所述多肽分别为由长度不

同的亮氨酸或苯丙氨酸残基组成的肽链，链肽羧

端与树脂上的氨基形成肽键偶联在树脂上。本发

明以脂肪酶为目标酶，以氨基树脂为载体，通过

芴甲氧羰基多肽固相合成方法接枝疏水性的氨

基酸链，在氨基树脂表面接枝链长不同的多肽片

段，在载体表面形成一种稳定的疏水性环境，获

得一种表面环境相对疏水的功能性载体；通过物

理吸附将脂肪酶结合于经修饰的氨基树脂上，通

B过疏水等作用力相结合，提高固定化酶的稳定

9性。

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N

C

CN106701729B权利要求书1/1页

1.一种以多肽修饰的氨基树脂为载体的固定化酶，包括脂肪酶和脂肪酶固定化所需载

体，其特征在于，

所述载体为多肽修饰的氨基树脂；

所述的多肽为氨基酸序列为10个亮氨酸残基组成的多肽片段；或10个苯丙氨酸残基组

成的多肽片段；

残基羧基端的羧基与氨基树脂上的氨基形成肽键偶合。

2.一种以多肽修饰的氨基树脂为载体的固定化酶的制备方法，其特征在于，包括如下

步骤：

1)树脂载体的制备；

采用芴甲氧羰基多肽固相合成法，将芴甲氧羰基保护的氨基酸与氨基树脂上的氨基形

成肽键偶联到氨基树脂上，并根据设计需求延长氨基酸链长度，得到经多肽修饰的氨基树

脂载体；步骤如下：

①将氨基树脂溶胀；

②按照氨基酸序列中的从羧基端到氨基端的顺序，依次将芴甲氧羰基保护的氨基酸偶

联到树脂上；

其中，所述的芴甲氧羰基保护的氨基酸为芴甲氧羰基-L-亮氨酸或芴甲氧羰基-L-苯丙

氨酸，两种氨基酸的氨基酸链长度均为10；

偶联过程中，使用的缩合试剂为1-羟基苯并三唑和N,N-二异丙基碳酰亚胺的组合物；

氨基树脂位点数、氨基酸、1-羟基苯并三唑和N,N-二异丙基碳酰亚胺的物质的量的比为1：

3：3：3；

③使用含20％v/v哌啶的N,N-二甲基甲酰胺溶液，反应10