湿法粉碎提取人参中有效成分的研究.doc

湿法粉碎提取人参中有效成分的研究 李巧如 宋文惠 黄彦利 (陕西省人民医院药剂科,陕西 西安710068) 摘要：目的 证明湿法粉碎提取法可用于人参中人参皂苷及人参多糖的提取。方法 以人参皂苷Rg1、Re、Rb1提出量、人参多糖及出膏率为指标，对湿法粉碎提取法与回流提取法及超声提取法提取结果进行比较。结果 湿法粉碎提取法可充分提取出人参中的人参皂苷Rg1、Re、Rb1和人参多糖，比超声提取法和回流提取法高。结论 湿法粉碎提取法操作简便，时间较超声提取法和回流提取法明显缩短，可用于人参中人参皂苷和人参多糖的提取。 关键词： 湿法粉碎提取法；超声提取法；回流提取法；人参皂苷；人参多糖 人参为五加科植物人参PanaxginsengC.A.Mey的干燥根。其中人参皂苷和人参多糖是其主要活性成分,人参皂苷具有抗氧化、调节免疫、促肾生长素作用及促进肾皮质DNA的合成；人参多糖具有增强免疫功能、促进造血功能、抗肿瘤、抗衰老及降血糖作用。但通常对人参的提取多以人参皂苷Rg1、Rb1、Re的含量作为其质量指标，且常用的提取方法有煎煮法、醇回流法、超声提取法、微波处理等，这些方法存在提取时间长、得率低、能耗大等不足。为了合理开发人参，减小资源浪费，有必要对人参总皂苷和人参多糖都进行提取。本文用湿法粉碎提取法[1]依次用80%乙醇和热水提取人参中人参皂苷和人参多糖，并与加热提取法和超声提取法比较。现将结果报道如下。 1　仪器及试药 1.1仪器　岛津10A-vp高效液相色谱仪：包括LC—10ATvp泵、SPD-M10Avp二极管阵列检测器、Shimadzu CLASS VP色谱工作站、Hypersil BDS C18色谱柱（ 150mm×4.6mm，5μm）（美国THERMO有限公司）；高速组织捣碎机（上海标本模型厂）；AUW120D电子天秤，CHIMADZU公司；752C紫外可见分光光度计（上海第三分析仪器厂）；JY92-3D型超声波细胞粉碎机（宁波新芝生物科技股份有限公司）。 1.2试药　人参皂苷Rg1 (110703-200322)、人参皂苷Re（754-200214）、人参皂苷Rb1(0704-200013)、D-无水葡萄糖（110833-200503）由中国药品生物制品检定所提供；人参,购于陕西省药材公司。乙腈、甲醇为色谱纯，其余试剂为分析纯。 2　方法与结果 2.1 提取方法 2.1.1 人参皂苷的提取 称取人参饮片（粗粉）20.00g，6份。加8倍量80%乙醇提取三次。湿法粉碎提取法：将三份人参饮片，于10000r/min高速粉碎分别提取5min、10min、20min，粉碎后药液于5000r/min离心5min，取上清液；超声提取法：取二份人参粗粉，分别超声30min、45min；加热回流提取法：取一份人参饮片提取2h。各提取液分别定容于200mL量瓶中，用于人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1含量测定及出膏率测定。 2.1.2 人参多糖的提取 将湿法粉碎提取人参皂苷后的药渣,分成7份,每份10.00g，加20倍量90℃水。湿法粉碎提取法：将三份人参药渣，于10000r/min高速粉碎分别提取5min、10min、20min；超声提取法：取二份人参药渣，分别超声30min、45min；加热回流提取法：取二份人参药渣，分别提取1h、2h。提取后的药液于5000r/min离心5min，取上清液作为各提取液，并分别定容于200mL量瓶中，用于人参多糖的测定。 2.2考察指标 2.2.1出膏率测定 精密量取各人参皂苷提取液20mL置已干燥至恒重的蒸发皿中,水浴蒸干,于105℃干燥3h，取出，置于干燥器中放置30min，取出称重，计算出膏率。 出膏率%=干膏量/药材量×100% 2.2.2人参皂苷含量测定 人参皂苷Rg1、人参皂苷Re、人参皂苷Rb1照中国药典2005版一部人参项下测定。 色谱条件 Hypersil BDS C18色谱柱；人参皂苷Rg1、人参皂苷Re用乙腈-水 (19：81)为流动相；人参皂苷Rb1乙腈-水 (35：65)为流动相；检测波长为203nm。 对照品溶液的制备 精密称取人参皂苷Rg1对照品、人参皂苷Rb1对照品和人参皂苷Re对照品适量，加甲醇制成每1ml含人参皂苷Rg10.42mg、人参皂苷Re0.38mg的混合溶液及人参皂苷Rb10.40mg的溶液，即得。 供试品溶液制备 精密量取上述各提取液10mL，置蒸发皿中，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔（0.45μm） （min） 第1次 第2次 第3次 1 粉碎提取 5 73.20 20.43 4.57 98.20 16.71