选修三1.1DNA重组技术的基本工具.ppt

又称基因拼接技术,或DNA重组技术。 是指就是按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因等技术赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 一、限制性核酸内切酶——“分子手术刀” 1.主要来源： 2.种类与命名： ⒊作用特点（专一性） (1)识别双链DNA分子的特定核苷酸序列 大多数限制酶的识别序列由6个核苷酸组成 少数的识别序列由4、5或8个核苷酸组成 (2)并且使每条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 4.作用结果 产生黏性末端或平末端 　 二、“分子缝合针” —— DNA连接酶 　 三、“分子运输车” ——基因进入受体细胞的载体 ⒈载体需要的条件： 　　⑴有1~多个限制酶切点 　　(2)导入基因能在受体细胞中复制、表达 　　(3)有某些标记基因，便于筛选 ⒉常用运载体： 　 ⑴细菌的质粒(能自我复制的一段环状DNA分子) 　 ⑵λ噬菌体衍生物或某些动植物病毒 * T T T T A G C C G G A A ? 基因工程概念 原 理： 操作水平： 结 果： 基因重组 DNA分子水平 定向地改造生物的遗传性状，获得人类所需要的品种。 基因工程 解决培育抗虫棉的关键步骤需要哪些工具？ “分子手术刀”—— 限制性核酸内切酶 关键步骤一： 抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取出来 关键步骤二： 抗虫基因与棉花DNA“缝合” 关键步骤三： 抗虫基因进入棉花细胞 “分子缝合针”—— DNA连接酶 “分子运输车”—— 基因进入受体细胞的载体 1.1、DNA重组技术的基本工具 主要从原核生物中分离纯化 现在已经从约300种微生物中分离出了约4000种限制性内切酶(限制酶)。 EcoRⅠ SmaⅠ 粘质沙雷氏杆菌 （Serratia marcesens） 大肠杆菌 （Escherichia coli R） 练习：流感嗜血杆菌的d菌株( Haemophilus influenzae d )中先后分离到3种限制酶，则分别命名为: HindⅠ、HindⅡ和HindⅢ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… EcoRⅠ ……GAATTC…… ……CTTAAG…… ……GAATTC…… ……CTTAAG…… 不同来源的DNA片段结合 将不同种来源的DNA片段连接起来 生物A基因片段 生物B基因片段 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 酶切 ……G　　AATTC…… ……CTTAA　　G…… 同一种 磷酸二酯键 T 1 2 3 4 5 A 1 2 3 4 5 H H H H HO T 1 2 3 4 5 A 1 2 3 4 5 H H H H O H2O + O 限制性内切酶与DNA解旋酶、DNA水解酶的区别 DNA解旋酶 将DNA两条链的氢键打开形成两条单链 切割磷酸二酯键，形成单个的脱氧核苷酸 DNA水解酶 EcoRⅠ 黏性末端　　　　 黏性末端 当限制酶在它识别序列的中轴线两侧将DNA的两条链分别切开时，产生的是黏性末端 ？思考 图中有几个切口，产生几个黏性末端？ 1个切口，2个黏性末端 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 SmaⅠ 平末端　　　平末端 当限制酶在它识别序列的中轴线处切开时，产生的是黏性末端 限制酶的识别序列： 能被限制性内切酶特异性识别的切割部位都具有回文序列：在切割部位，一条链正向读的碱基顺序与另一条链反向读的顺序完全一致。 想一想限制酶所识别的序列有什么特点？ 中心对称 限制酶所识别的序列，无论是6个碱基还是4个碱基，都可以找到一条中轴线（如图），中轴线两侧的双链DNA上的碱基是反向对称、重复排列的。 要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性(平)末端？ 要切两个切口，产生四个黏性(平)末端。 思考? CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT GGCATCTTAA AATTCCGTAG 目的基因 ①作用: 把切下来的DNA片段拼接成新的DNA，即将脱氧核糖和磷酸连接起来. ②作用原理：