CYP19A基因对牙鲆(Paralichthys olivaceus)卵巢发育周期的表观遗传调控机制.doc

  CYP19A 基因对牙鲆(Paralichthys olivaceus) 卵巢发育周期的表观遗传调控机制# 5 10  摘要：此研究以成年雌性牙鲆(Paralichthys olivaceus)为研究对象，采用荧光实时定量方法检 测不同卵巢发育期的性腺 P450aromA (CYP19A) 酶基因表达，运用重亚硫酸氢盐修饰后测 序法测定其启动子区 CpG 富集区每个 CpG 位点甲基化模式。结果发现，在整个卵巢发育期 都有 CYP19A 基因表达，在期达到最高值，然后下降至卵巢发育初期水平；而启动子 CpG 富集区整体甲基化水平却与之成相反趋势。这暗示 P450aromA 酶是催化雌激素合成的关键 酶，促进卵母细胞成熟；CYP19A 基因表达可能受启动子区 CpG 甲基化修饰影响。这些结 果初步解释了 CYP19A 基因的生理功能及其表达调控的分子机制。 关键词：牙鲆；DNA 甲基化；CYP19A 基因；基因表达；启动子 中图分类号：S917 15 Epigenetic regulation mechanism of CYP19A gene on ovary reproductive cycle of Japanese flounder (Paralichthys olivaceus) Ding yuxia, Hefeng, Ma Ruiqin, Wen Haishen, Li Jifang 20 25 30 35 40 (Fisheries College, Ocean University of China, 5 Yushan Road, ShanDong QingDao 266003) Abstract: The adult female Japanese flounder was obtained in this study. Quantitative PCR was used for detecting the gene expression of CYP19A gene during the reproductive cycle, and bisulphate PCR was performed for described the DNA methylation pattern of CpG rich region in CYP19A gene promoter domain. The result founded the CYP19A gene was expressed in the period of oocyte maturation. In stage Ⅳ was reached the highest level, then decreased in stage Ⅴ, While, the opposite tendency was showing in the DNA methylation level of promoter. This implied that P450aromA enzyme play important role in catalyzing synthesis of estrogen and promotes oocyte maturation; DNA methylation modification of CpG sites in promoter may affect the gene expression. These findings preliminary explain the function of CYP19A gene and the molecular mechanism of expression regulation. Keywords: Japanese flounder; DNA methylation; CYP19A gene; gene expression; promoter 0 引言 细胞色素 P450 芳香化酶（P450arom）是目前已知的唯一的一个不可逆地催化雄烷二酮 和睾酮转化为雌酮和雌二醇的酶，是合成雌激素的关键酶和限速酶[1,2]。在鱼类中却发现了 由两种不同基因编码的 P450arom，分别来自性腺（CYP19A）和脑（cyp19b）[3-6]。雌激素 对鱼类的性别分化、性腺发育起重要作用。因此，芳香化酶细胞色素 P450 对调节整个性类 固醇激素的平衡有重要意义。 DNA 甲基化是构成遗传信息的重要表观因子。基因表达不仅由基因序列决定，而且受 染色质结构和 DNA 甲基化模式影响[7]。在斑马鱼中，胞嘧啶甲基化通过干涉转录因子的结 合可以沉默基因表达[8]。此外，有研究证明 CpG 位点去甲基化增加特异基