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毒理学实验 实验一 实验动物的一般操作技术 一、目的 二、内容 （一）实验动物的选择 1、物种的选择：啮齿类、非啮齿类 基本原则： 代谢、生化、毒理学特征与人最接近的 自然寿命不太长的 易于饲养和实验操作的 经济且易于获得的 2、品系的选择：遗传学控制分类 近交系：纯品系 杂交群：F1代 封闭群：5年内，随机交配 遗传均一性： 一种毒物固定使用同种品系 3、微生物学和寄生虫控制的选择 Ⅰ级：普通动物，开放系统饲养 Ⅱ级：清洁动物，屏障系统饲养 Ⅲ级：SPF动动，屏障/隔离系统饲养 Ⅳ级：无菌动物，隔离系统饲养 4、个体选择 性别： 年龄：急性、慢性 以体重估计：组内、组间差异 生理状态：雌--未产未孕，避免妊娠、激素影响 健康状况：健康动物 健康动物辨认： 健康动物辨认：外观体形丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼睛明亮，行动迅速、反应灵活，食欲及营养状况良好。 (1)眼：明亮，瞳孔双侧等圆，无分泌物。 (2)耳，耳道无分泌物溢出，耳壳无脓疮。 (3)鼻：无喷嚏，无浆性粘液分泌物。 (4)皮肤：无创伤、无脓疮、疥癣、湿疹。 (5)颈部：要求颈项端正，如有歪斜提示可能存在内耳疾患，不应选作实验动物。 (6)消化道：无呕吐、腹泻，粪便成形，肛门附近被毛洁净。 (7)神经系统：无震颤、麻痹。若动物(大鼠、小鼠)出现圆圈动作或提尾倒置呈圆圈摆应放弃该动物。 (8)四肢及尾：四肢、趾及尾无红肿及溃疡。 （二）动物性别鉴定 (1)大鼠、小鼠：主要依肛门与生殖孔间的距离区分，间距大者为雄性，小者为雌性。成年雄鼠卧位可见到辜丸，雌性在腹部可见乳头。 (2)豚鼠；用一只于抓住豚鼠颈部，另一只手扒开靠生殖器孔的皮肤，雄性动物在圆孔中露出性器官的突起，雌性动物则显示三角形间隙，成年雌性豚鼠胸部有两个乳头。 （三）动物抓取 正确地抓取固定动物，既不损害动物健康、不影响观察指标，又防止被动物咬伤 (1)小鼠：先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台上向后拉，在其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，把后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。 (2)大鼠：大鼠的抓取基本同小鼠，只是大鼠比小鼠性情凶猛，不易用袭击方法抓取。为避免咬伤，可带上帆布或棉纱手套。采用左手固定法，用拇指和食指捏住鼠耳，余下三指紧捏鼠背皮肤，置于左掌心中。 (3)豚鼠：豚鼠胆小易惊，在抓取时要稳、准、迅速。用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，另一只手托住臀部即可。 (4)兔：用右手抓住兔颈部的毛皮提起，然后左手托住其臀部或腹部，让其体重的大部分重量集中在左手上。注意不要抓取双耳或抓提腹部。 （四）实验动物称重、编号、标记 染色法：苦味酸、品红 耳缘孔口标记： 项圈 （五）动物随机分组：随机数字表 （六）染毒途径和方法 经口（胃肠道）染毒 喂饲：不易挥发、不易水解、无异味、不影响营养 吞咽胶囊： 灌胃：灌前禁食空腹，不饮水 小鼠、大鼠或豚鼠：左手抓住鼠背部及颈部皮肤将动物固定，右手持注射器，将灌胃针插入动物口中，沿咽后壁徐徐插入食管。针插入时应无阻力，若感到阻力或动物挣扎，应立即停止进针或将针拔出，以免损伤或穿破食管及误入气管。 经呼吸道染毒 静式吸入 动式吸入 气管内注入 经皮肤染毒 斑贴法（家兔） 被毛的去除：剪毛、拔毛、脱毛 浸尾法（大、小鼠） 注射染毒：静脉注射、肌肉注射、腹腔注射、皮下注射、皮内注射 （七）生物标本采集 1.血液采集： 大、小鼠鼠尾采血法 眼眶静脉丛采血法 腹主动脉或股动(静)脉采血法 断头采血法 家兔耳缘静脉采血法 心脏采血法 实验动物安全采血量 2.尿液、粪便收集：代谢笼 （八）动物处死 脊椎脱臼法 断头法 急性大失血法 击打法 麻醉致死法 麻醉后急性放血法 空气栓塞法 化学药物致死法 开放性气胸法 微核实验动物染毒 阴性对照组：生理盐水 阳性对照组：环磷酰胺40-60mg/kg 高剂量组：敌敌畏20mg/kg 中剂量组：敌敌畏10mg/kg 低剂量组：敌敌畏5mg/kg 实验二急性经口毒性试验 一、目的 掌握LD50 计算方法和急性毒性分级标准 熟悉经口灌胃技术 了解急性毒性试验的设计原则 急性毒性、急性毒性分级标准 急性毒性：一次或多次接触，短时间产生的毒性效应，包括一般行为和外观改变，大体形态改变以及死亡效应等。 农药的急性毒性分级：低、中、高、剧毒 LD50计算方法 改良寇氏法：计算简便，准确率高，常用 霍恩法 序贯法 Bliss法 改良寇氏法要求 每组动物数相等 各剂量组组距呈等比级数 死亡呈正态分布 最低剂量组死亡20% 最高剂量组死亡80% 死亡不倒置 二、原理 健康动物?按体重随机分组?一次或多次经口给药?观察