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膜片钳技术讲座.ppt 90页

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慢电容(Slow capacitance, Cslow)与 快电容(Fast capacitance, Cfast) 补偿输入端 Rf 电流输出端 命令电压 微电极 通路 (电极)电阻 慢 (细胞)电容 快(电极) 电容 高阻封接形成后,快电容主要为电极电容,慢电容为膜片电容,后者数值较小。因此此时要补偿的电容主要为电极电容。 打破细胞膜形成全细胞记录模式后,主要补偿的是慢电容,即细胞膜电容。 输入电容(Input capacitance, Cin) 是膜片钳系统中的分布电容,在膜片钳实验中会给有效信号的记录造成影响,因此必须予以去除。 主要包括: 1. 跨壁电容Ct; 2. 电极非浸液部与邻近地表之间形成的漂浮电容Cs; 3. 电极夹持器、探头线与地表间形成的漂浮电容Cs; 4. 放大器输入端与大地、自身电源、机壳间的输入电容Ca。 Cin共约几个到十几个pF。 时间常数(Time constant, τ) 是指电容充放电变化了原来的63%时所需要的时间。   膜反应的时间常数τ=Rs×Cm 当Rs=10 MΩ,Cm=33 pF时,膜反应的时间常数τ=330μs,破膜形成全细胞记录模式后,通路电阻Ra一般比电极电阻大两倍,充放电时间更长。 膜电容充电时,跨膜电流 Im由Icharge和IRm组成,Icharge为膜电容瞬变值,IRm很快达到稳定,成为稳态成分。 膜电容放电时,跨膜电流 Im为Idischarge,此时没有稳态成分电流。显然,Icharge = Idischarge。 膜电容充放电时跨膜电流变化曲线 充电电流 放电电流 Im Icharge IRm Idischarge I Time (τ) 一、串联电阻补偿 Rs引起的误差有如下三方面 1. 膜电位对步阶命令电压的反应时间延迟; 2. 串联电阻产生电压降,严重影响膜钳制电位的数值; 3. 串联电阻与膜电容形成了一个单极RC滤波器,限制了摄取电流信号的带宽. 5. 膜片钳系统中的串联电阻和电容补偿 串联电阻补偿的目的 1. 加速膜电位对步阶命令电压的反应时间 膜反应时间常数τ=RsCm。 补偿后, τ=RsCm(1-% PREDICTION/100)。 若 Rs=10 MΩ,Cm=5 pF, % PREDICTION分别为0、50、90时, 则τ分别为50μs、 25μs、5μs。 膜电位Vm为: 可见补偿后,明显加快了膜电位对命令电压的反应时间。 2. 去除串联电阻产生的电压降 电极电压降Vp=Rs×Im,Im为膜离子通道电流。 如果Im=2nA,Rs=10 MΩ, 则Vp=20 mV,表明膜电位将偏离钳位电压20 mV。 CORRECTION电路 3. 消除RsCm滤波器对摄取信号带宽的限制 单极RC滤波器对电流幅度无影响,但滤波器的角频率(-3dB)f=1/2πRsCm。当Rs=10 MΩ,Cm=33 pF时,f=483Hz,即此滤波器将信号的带宽限制为480Hz。串联电阻补偿达90%时,信号带宽由原来的f=1/2πRsCm=320Hz增加为f=1/2π(Rs/10)Cm=3200Hz=3.2KHz。 二、电极电容及膜电容补偿 1. Axopatch放大器(Axopatch 1和200系列)提供两对儿对电极电容进行补偿的控制钮: Fast magnitude和Fast time constant(τ)钮 Slow magnitude和Slow time constant(τ)钮 “Fast”钮补偿快电容,即放大器输入电容,其中以电极电容为主; “Slow”钮补偿慢电容,即电极尖端与大地之间的电容,主要是膜片电容。大部分的电容瞬变值可用“Fast”控制钮进行补偿。 提供WHOLE-CELL CAP钮用于补偿膜电容。 Axopatch 200B Fast magnitude , Fast time constant(τ) 钮 Slow magnitude , Slow time constant(τ)钮 WHOLE-CELL CAP钮 GeneClamp 500B Fast magnitude , Fast time constant(τ) 钮 Slow magnitude , Slow time constant(τ)钮 2.Axopatch放大器 (Multiclamp 700A) 所有控制钮均由计算机程序 “MultiClamp Co

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