分子植物病理学教案.ppt

分子植物病理学Molecular Plant Pathology 第一章 病原物致病相关基因 第二节 植物病毒的侵染过程 与致病相关基因 1 侵染过程（自学） 王金生.《分子植物病理学》.中国农业出版社，1999. 肖火根.病毒在植物体内的运转.病毒学报,2001,17(3):282-287. 张振臣.植物病毒胞间运动及运动蛋白基因介导的抗病性研究 进展.农业生物技术学报，2000,8(4):403-408. 曹雪松.植物病毒在胞内和胞间运动的研究.莱阳农学院学报， 2002,19(4):251-252. 2 植物病毒致病相关基因 2.2 复制酶基因（replicase gene） 2.4 卫星病毒（satellite RNA ） 2.5 核酶基因（ribozyme gene） 第三节 植物病原细菌的致病相关基因 突变方法 1.物理诱变 紫外线（UV）、X射线和、γ射线诱变；离子束诱变，离子束是元素的离子经高能加速器加速后获得的放射线；中子 2.化学诱变 化学诱变剂：碱基类似物、亚硝酸如亚硝基胍(NTG）、丫定橙染料、烷化剂如甲基磺酸乙脂（EMS）等 3.转座子插入突变 1.5 克隆片段的亚克隆分析 2 与病理过程有关的基因 2.4.5 hrp 基因 2.4.6 dsp 基因 2.4.9 编码未知产物的基因 4 植物病原细菌致病基因的调控机制 5 植物病原细菌的致病岛（毒力岛） 第四节 植物病原真菌的致病相关基因 2 病原真菌致病过程的相关基因 3 病原真菌低致病力的分子遗传基础 4 植物病原真菌致病基因的调控机制 第二章 寄主植物的抗病基因 第二节 植物抗病基因的克隆策略与方法 第三节 植物抗病基因的鉴定 第四节 植物抗病基因的结构和功能 第三章 植物防卫反应基因 2 防卫反应基因的研究策略与克隆 3 防卫反应基因的主要类型 第四章 寄主－病原物相互作用 第五章 植物抗病反应的信号识别与传导 2 植物抗病信号传导途径及其相互作用 2.1 经典的信号传导模式 2.2 SA-依赖性途径(SA dependent pathway) 2.3 SA-非依赖性途径(SA independent pathway) 2.4 植物防卫反应信号传导的互作 第六章 植物抗病基因工程的基本原理与方法 1 植物抗病基因工程策略 2 植物抗病基因工程的技术环节 第七章 转基因作物及其外源抗性基因检测技术 实时荧光PCR（Real Time PCR） 1.4 导入其它蛋白基因 ◆ 贾士荣,等(1993)和M.Hassan (1993),et al.向马铃薯导入cecropin基因后提高了马铃薯对青枯病的抗性。 ◆ J.M.Jaynes(1993),et al.将cecropinB基因导入烟草后获得的转基因植株，提高了其对R.solanacearum引起病害的抗性。 ◆ 黄大年,等(1997)将cecropinB和cecropinD基因导入水稻幼胚，获得的转基因水稻植株可明显地提高对水稻白叶枯病的抗性，同时也获得了高抗水稻条斑病和水稻白叶枯病的高抗品系。 ◆ 至今已分离的供植物基因工程应用的目的基因有100多个，其中研究得比较多的是抗病毒、细菌和真菌的基因，能杀死害虫或使害虫拒食的基因，能抵抗各种除草剂的基因，能抗逆境如干旱、高寒、高温盐碱等的基因，能提高植物体中蛋白质含量或蛋白质品质的基因等等。这些基因中有些是来自植物本身，有些来自微生物，还有少数是人工合成的。 2.1 目的基因的分离和鉴定 ◆ 对已知序列进行分子克隆 ◆ 从蛋白质到基因序列 PCR扩增 构建cDNA文库 构建基因组文库 ◆ 与已知基因紧密连锁基因的分离 ◆ 根据植株或细胞表型变异进行基因分离 转座子标签法 图位克隆法 基因挽救技术 基因组相减法 cDNA差式显示 转座子导入细胞 目的形状突变株 构建核DNA文库 用转座子序列作探针进行杂交 分析转座子两侧序列并以此作探针 野生型细胞核DNA 构建 核DNA 文库 完整的目的性状基因 转座子标签法流程图 2.2 表达载体的构建 ◆ 目的基因分离后，往往需要经过修饰才能应用于植物基因工程。构建植物表达载体就是在目的基因的5’端加上启动子，在基因的3’端加上中止子，以便使外源基因能在植物中有效地