细菌的检查方法.pptVIP

病原菌检测 显微镜放大法： 普通光学显微镜 ：0.25um 0.25mm 电子显微镜：透射电镜、扫描电镜 染色法 直接涂片镜检 形态和染色性具有特征的致病菌，直接涂片染色后镜检有助初步诊断。 痰液 抗酸性细长杆菌 结核杆菌 脑脊液 淤血点 肾形,G-双球菌 脑膜炎奈瑟菌 脓液 G+葡萄串状球菌 葡萄球菌 分离培养和鉴定 确诊细菌感染性疾病最可靠的方法（金标准),有助于选用抗菌药物及评价疗效。 ①普通培养法（需氧培养法） ②高渗培养法 ③厌氧培养法 分离培养和鉴定 ①培养特征：营养、生长条件、 菌落特征 ②形态特征：细菌形态、排列、 染色性 ③生化反应：检测细菌对各种基质（糖类和蛋白质）的代谢作用和代谢产物的差异，借以区别和鉴定细菌。 生化反应 如:幽门螺杆菌尿素酶分解尿素产氨,使培养液变碱,pH指示剂变色。 微量、快速、半自动或自动细菌生化鉴定和细菌药敏分析系统，使病原菌检出水平提高，时间缩短。 病原菌检测 血清学试验 用含已知特异性抗体的免疫血清，可有效检出标本中极微量细菌特异抗原，或与分离培养出的未知纯种细菌进行血清学试验，确定致病菌的种或型。 常用方法有玻片凝集试验、酶联免疫吸附试验（ELISA）、协同凝集、乳胶凝集、免疫电泳、间接血凝等试验。 病原菌检测 动物试验 利用实验动物可进行病原菌的分离鉴 定，检测细菌毒力等。 常用实验动物有小鼠,豚鼠和家兔等。 接种途径有皮内、皮下、腹腔、肌 肉、静脉等。 病原菌检测 药物敏感试验 纸片法 试管稀释法 病原菌检测 其他方法 分子生物学技术 核酸杂交技术 PCR 生物芯片技术 聚合酶链反应是一种模拟天然DNA复制的体外扩增法，其基本原理如下： 加热使双链DNA解开螺旋 ↓ 在退火温度条件下引物同模板杂交 ↓ 在Taq DNA聚合酶，dNTPs，Mg2+和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物 ↓ 重复上述变性→退火→引物延伸过程至25-40个循环。靶序列被扩增上百万倍， 达到体外扩增核酸序列的目的。 核酸杂交技术 生物芯片技术 该技术系指将大量（通常每平方厘米点 阵密度高于 400 ）探针分子固定于支持物 上后与标记的样品分子进行杂交，通过检 测每个探针分子的杂交信号强度进而获取 样品分子的数量和序列信息。 血清学诊断 用已知抗原检测病人血清抗体 直接凝集试验 补体结合试验 中和试验 乳胶凝集 ELISA * * 细菌学诊断 标本采集和 送检六原则 避免杂菌污染 不同期不同标本 用抗生素以前 采集病变明显部位 标本作好标记 标本必须新鲜 细菌形态与结构检查 结晶紫1min 卢戈碘 1min 95%乙 醇30s 稀释复红 30s 的意义 1.将细菌区分为2大类 2.指导选择抗菌药物 3.用于细菌致病性等方面的研究 病原菌检测 病原菌检测 临床标本 预处理 增 菌 接种培养基，分离单个菌落 各种鉴定试验 涂片染色 快速诊 断试验 生化试验 血清学实验 涂片染色 药敏试验 动物试验 初步诊 断报告 最终诊断报告 一般检验程序 病原学诊断 病原菌检测 病原菌检测 PCR技术 杂交方法是一种分子生物学的标准技术，用于检测DNA或RNA分子的特定序列（靶序列）。 DNA或RNA先转移并固定到硝酸纤维素或尼龙膜上，与其互补的单链DNA或RNA探针用放射性或非放射性标记。 在膜上杂交时，探针通过氢键与其互补的靶序列结合，洗去未结合的游离探针后，经放射自显影或显色反应检测特异结合的探针。