腺瘤性结肠息肉病基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值.pdfVIP

924 　　肿瘤2011 年10 月第31 卷第10 期　TUM OR Vol. 31, October, 2011 DOI: 10.3781/j .issn.1000-7431.2011.10.009 Copyright© 2011 by TUM OR 临床研究·Clinical Research 腺瘤性结肠息肉病基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值 1 1 1 1 1 1 2 1 胡　瑜 ，华　东，程之红 ，吴玉玉 ，谢其根 ，王琼瑶 ，余　坚，黄朝晖 1 ．无锡市第四人民医院肿瘤研究所，无锡　2 14062 ；2 . 上海市肿瘤研究所癌基因及相关基因国家重点实验室， 上海　200032 [摘要]　目的：建立甲基化敏感性限制性内切酶 - 定量 PCR （methylation-sensitive restriction enzy me-quantitative PCR，M SRE-qPCR ）方法，并应用该方法探讨血浆腺瘤性结肠息肉病 （adenomatous poly posis coli，A P C）基因甲 基化检测在肝细胞癌 （hepatocellular carcinoma，HCC）诊断中的应用价值。方法：用 Hha Ⅰ消化 DNA 样品，qPCR 技术评估酶切效率，建立优化的M SRE-qPCR 方法。用 M SRE-qPCR 法检测 45 例肝组织 （20 例 HCC 及其相应匹 配的非癌组织和 5 例正常肝组织）中A P C 甲基化水平 ；应用亚硫酸氢盐测序 PCR （bisulfite sequencing PCR，BSP） 对 M SRE-qPCR 检测结果进行验证，并与甲基化特异性 PCR （methylation-specific PCR，M SP）检测方法比较。 运用 M SRE-qPCR 技术检测 72 例 HCC、37 例肝良性病变和 41 例健康志愿者血浆标本的A P C 甲基化状态。结果： 建立的M SRE-qPCR 方法可定量检测低至 1% 的A P C 甲基化片段。M SRE-qPCR 和 M SP 检测结果均显示，HCC 组织中A P C 基因发生高频率甲基化。M SRE-qPCR 检测结果经 BSP 验证准确无误，且与 M SP 检测结果具有较好 的一致性（Kapp a ＝0.955 ，P ＜0.000 1 ）。HCC 患者血浆A P C 甲基化水平高于肝良性病变及健康志愿者（P ＜0.000 1）。 血浆 A P C 甲基化分析与血清甲胎蛋白（alpha-fetoprotein，A FP）联合检测可提高 HCC 诊断效率。结论：M SRE- qPCR 可定量检测A P C 甲基化水平。血浆A P C 甲基化分析对于 HCC 的非侵入性诊断具有重要价值。 [关键词]　癌，肝细胞；DNA 甲基化；血浆；分子诊断技术；聚合酶链反应；限制性内切酶；基因，腺瘤性结肠 息肉病 [中图分类号]　R735.7 [文献标志码] A [文章编号]　1000-7431 (2011) 10-0924-06 Clinical value of methylation of plasma adenomatous polyposis coli gene in the molecular diagnosis of hepatocellular carcinoma 1 1 1 1 1 1 2 1 hu Yu , huA Dong , ChENG zhi-hong , Wu Yu-yu , XIE Qi-gen , WANG Qiong-yao , YuJian , huANG zhao-hui 1. o ncology Institute, Wuxi Fourt