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项目实施工作总结报告 一、一、项目基本情况项目基本情况 一一、、项目基本情况项目基本情况 《基于LC-MS法测定水产品及饲料中己烯雌酚的研究》是浙江省科技厅2008 年度分析测试科技计划项目，项目标号 2008F70026.项目承担单位为杭州市农业 科学研究院。 我们在日常检测中常使用酶联免疫吸附法作为一种半定量筛选法，但由于 用该方法一旦检出，需要通过其他方法确认，目前的液相色谱法的检出限又达不 到要求，因此对己烯雌酚液相色谱－质谱联用 （LC-MS）法的研究开发就很是迫 切，该法可以同时满足检出限、定性和定量的要求。 1、项目合同规定的主要内容 ⑴LC-MS测定参数的确定 ⑵水产品及饲料中己烯雌酚提取条件的确定 ⑶水产品及饲料中己烯雌酚净化条件的确定 2、项目预期目标 ⑴形成一套利用 LC-MS测定水产品及饲料中己烯雌酚的方法。 ⑵该方法技术指标 ①己烯雌酚最低检测限0.5 ng/ml。 ②己烯雌酚回收率：饲料中 ≥85％；水产品中 ≥80％。 ③精密度：变异系数≤10％ 二、二、项目执行情况项目执行情况 二二、、项目执行情况项目执行情况 (一(一)) 对照合同书项目总体实施结果对照合同书项目总体实施结果 ((一一)) 对照合同书项目总体实施结果对照合同书项目总体实施结果 课题组经过近 2 年的研究与实施，按照制定的项目实施计划，已经完成了 质谱条件的调谐和确定、UPLC 条件的优化确定；水产品及饲料中己烯雌酚提取 试剂的选择、提取方法的确定；水产品及饲料中己烯雌酚净化条件的确定等三项 合同规定的主要研究内容，实现了合同书中规定的与其目标。项目总体完成情况 如下： ⑴形成了一套利用 LC-MS测定水产品及饲料中己烯雌酚的方法 ⑵经过实验验证，该方法对水产品、饲料中己烯雌酚最低检测限为 0.5ng/ml。 ⑶经过实验验证，该方法对水产品、饲料中己烯雌酚检测回收率为饲料中≥85 ％，水产品中≥80％。 (4) 经过实验验证，该方法对水产品、饲料中己烯雌酚检测结果的变异系数≤10 ％ (二(二))项目主要工作措施与结果项目主要工作措施与结果 ((二二))项目主要工作措施与结果项目主要工作措施与结果 1、1、LCLC--MSMS 测定己烯雌酚的测定己烯雌酚的 UPLCUPLC 和和 MSMS 参数的确定参数的确定 11、、LCLC--MSMS 测定己烯雌酚的测定己烯雌酚的 UPLCUPLC 和和 MSMS 参数的确定参数的确定 (1) 己烯雌酚检测的质谱条件： ①根据三离子原则，用 m/z267,251 和 237 配合保留时间确认己烯雌酚的存 在。 ②质谱参数： 己烯雌酚属于酚类化合物，所以离子源为负离子源 （ESI-），用1ug/mL标准 溶液调谐 MS参数。经过调谐，得出离子丰度最大的质谱参数： 毛细管电压 3KV ，离子源温度 110℃，脱溶剂气温度 300℃，脱溶剂气流量 600L/h，锥孔气流量 50L/h。 扫描方式为多反应检测(MRM)，负离子方式。用于定量分析的离子为m/z267 →237,锥孔电压 40v 和碰撞能量 28eV，定性分析离子 m/z267→251, 锥孔电压 40v和碰撞能量 25eV，分析时氩气流量 0.15ml/min。 (2) 己烯雌酚检测的UPLC色谱条件 UPLC系统使用 Waters超高效液相色谱柱 （BEH C18柱，50*2.1mm，1.7µm）； 流动相的选择及优化：选甲醇作为流动相。在 UPLC 系统对甲醇－水进行优 化得到最佳洗脱方式： 甲醇－水梯度洗脱，0→1min，15％→30％（甲醇），1→2min，30％→70％ （甲醇），2→3min，30％→15%（甲醇）；柱温：30℃；流速 0.3ml/min；进样量： 10µl。 2、2、LCLC--MSMS 测定己烯雌酚测定己烯雌酚主要指提取剂与提取方法的确定主要指提取剂与提取方法的确定与优化与优化。 。 22、、LCLC--MSMS 测定己烯雌酚测定己烯雌酚主要指提取剂与提取方法的确定主要指提取剂与提取方法的确定与优化与优化。。 (1)水产品中己烯雌酚主要以游离态形式存在，经过提取实验后，选择使用 甲醇直接提取。 (2)饲料属于成分非常复杂的混合物