高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术原理与应用.ppt

高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)技术原理与应用 河北医科大学药学院 王巧 什么是MS仪: Mass Spectrometry 一种能够把分子转化生成带电离子,并在气态中根据质荷比(m/z : m质量 z电荷数 )的不同把离子进行分离并进行检测的仪器. 质谱技术： 质谱分析过程：样品通过进样系统进入离子源，由于结构性质不同而电离为各种不同质荷比（m/z）的分子离子和碎片离子，而后，带有样品信息的离子碎片被加速进入质量分析器，不同的离子在质量分析器中被分离并按质荷比大小依次抵达检测器，经记录即得到按不同质荷比排列的离子质量谱，也就是质谱 (mass spectrum)。 质谱：按离子的质荷比的大小依次排列形成的图谱 质谱分析系统的基本组成 真空系统 1电子轰击电离(EI) GC/MS 2化学电离(CI) GC/MS 3 大气压化学电离(APCI) LC/MS 4电喷雾电离(ESI) LC/MS 5基质辅助激光解吸电离(MALDI) 6场致电离 -- Field ionization 7火花放电 -- Spark source 8激光电离 -- Laser ionization (LIMS) 9共振电离—Resonance ionization(RIMS) 10热电离 -- Thermal ionization (TIMS) 11快原子/离子轰击(FAB/SIMS )离子源 等离子体解吸(PD) Turbo VTM 离子源 电喷雾(ESI)离子源工作原理 离子源的选择---ESI 优点 适合范围广:分析离子型/极性化合物、难挥发或热不稳定性化合物 多电荷离子的形成，可以分析高分子量化合物 灵敏度高 离子源的选择--- APCI 优点 有一定挥发性的中等极性或低极性的小分子化合物 对溶剂选择、流速和添加物的依赖性较小 离子源 应用 制药：合成过程中中间体、成品的结构鉴定，杂质分析 天然药物与中药分析：结构鉴定，质谱规律，中药药效物质基础 药物代谢药物动力学：药动学 药物代谢物寻找 代谢组学(metabonomics) 蛋白组学（生物大分子分析） 烟草 食品分析 公安毒物检查 体育兴奋剂检测 中药中非法添加化学药 新生儿筛查 制药行业 合成过程中中间体、成品的结构初步鉴定 杂质分析 液质联用分析美伐他汀的有关物质 天然产物与中药分析 Zorbax SB-C18色谱柱＆保护柱 流动相：(A)乙腈-(B)0.3%醋酸水溶液 0-20 min ：A 25%-30%，B 75%-70% 20-37 min：A 30％-50％，B 70％-50％ 37-45 min：A 80%，B 20% 流速：1.0 ml·min-1 检测波长：275 nm 全波长扫描范围：190-400 nm 柱温：40℃ ESI源 负离子检测 扫描范围：80-1000 m/z 鞘气流：50 arb 辅助气流：15 arb 源电压：5.00 kV 毛细管温度：350℃ 毛细管电压：-12.00 V 管透镜补偿电压：-10.00 V 中药制剂中掺入西药成分分析 液质联用分析中药降糖制剂中掺入的西药成分 药物代谢与药物动力学 公安、司法鉴定 LC-MS/MS技术在法庭科学中的应用 毒品/滥用药物：可卡因、海洛因、吗啡、摇头丸、迷幻药等等 2001年1-6月缴获海洛因6201千克、鸦片1927千克、冰毒2970千克、摇头丸64万粒、度冷丁1400支、咖啡因80千克、罂粟壳40吨、易制毒化学品72吨 毒物：鼠药、农药、工业毒物、药物毒物、蛇／蝎／蜂毒、河豚毒素及其它海洋生物毒素、植物毒素等等 爆炸物：硝化甘油、OCTOGEN、HMX、EGDN、HEXOGEN、RDX、NG、TETRYL、DNT和PETN等等 其它化合物：案发现场遗物如油漆、血迹、高聚物等 质谱在生物大分子研究领域中的应用 1 蛋白质和多肽的分析 2 寡核苷酸和核酸的分析 3 微生物鉴定 4 药物设计 5多糖结构测定 蛋白质和多肽的分析 分子量测定 肽谱测定 肽及蛋白质序列测定 巯基和二硫键定位 蛋白质翻译后修饰分析 抗原决定部位指认 生物分子相互作用及非共价复合物分析 液质联用蛋白质组学鉴定方法的建立 其在正常人尿蛋白质组鉴定中的应用 （中国协和医科大学博士论文） 液质联用分析重组人白细胞介素2的肽图 （药学学报2006, 41 (8) : 756 – 760） 新生儿筛查 新生儿筛查是对一些目前还无法在产前做出诊断的先天性代谢性疾病及内分泌疾病在新生儿进行普查，以筛选出病人，提前做出诊断，提前进行治疗 Why? 这些先天性疾病疾病目前在出生以前用产前检查的方法还无法诊断，婴儿