甲醇对土壤甲烷氧化的影响及其微生物学机理.docVIP

甲醇对土壤 张光亚1，方柏山1，闵航2，陈美慈2 1. 华侨大学生物工程与技术系，福建 泉州 362011；2. 浙江大学生命科学学院，浙江 杭州 310029 摘要：对设施栽培土壤甲烷氧化研究结果表明不同土壤对甲烷氧化能力各异，可能与土壤理化性质有关土壤微生物是甲烷氧化的主要不同碳源对甲烷氧化影响各异，纤维素对甲烷氧化抑制作用最小，高浓度的甲醇则对甲烷氧化具有强烈抑制作用在甲烷释放极少的设施栽培土壤中，兼性营养甲烷氧化菌可能在甲烷氧化中占据主地位。 设施栽培兼性营养甲烷氧化菌A 文章编号：1672-2175（2003）04-0469-04众所周知，甲烷是大气中主要的碳氢化合物，对温室效应的贡献仅次于CO2。据IPCC估计[1]，2000年甲烷的释放量为300 Tg，到2010年将增至400 Tg～600 Tg。土壤是甲烷主要源与汇，一定生态条件下的土壤产生甲烷，而另生态条件下的土壤又能氧化甲烷。作为现代农业工程建设的设施栽培，自80年代以来有了长足的发展。设施栽培是一个与露地栽培完全不同的生态环境，其中甲烷的释放和氧化也具有不同与露地的特点，有关设施栽培土壤甲烷氧化的研究相对较少[2]。 土壤对甲烷的氧化主要由土壤中甲烷氧化菌完成。甲烷氧化菌是一群特殊的以甲烷为唯一碳源和能源的好氧细菌。许多影响土壤甲烷氧化的因子（如土壤水含量、土壤氮素及农事活动）已有相当深入的研究，但对维持生长和活性的底物对甲烷氧化的影响则知之甚少。甲醇是一些甲烷氧化菌除甲烷之外的重要底物，也是甲烷氧化的中间产物，它对甲烷氧化有何影响并从微生物角度加以现将结果报道如下。 材料与方法 .1 供试土壤 供试土壤为浙江大学蔬菜研究所大棚土壤（简称A）和杭州市蔬菜研究所以色列连栋塑料温室土壤简称B。土壤基本化性质列于表1。 两种土壤的基本理化性质 土壤 土壤质地 有机质 /(g(kg-1) 有效氮速效磷速效钾pH w/(mg(kg-1) A. 乌松土 壤土 54.77 104.99 58.87 7.55 B. 潮闭土 砂质壤土 139.6 39.64 70.00 8.00 1.2 试验项目 取过筛（孔大小为2 mm×2.5 mm）的土壤A和土壤B各20 g分别装于120 ml的血清瓶中，用异丁基胶塞密封，随即各加入0.5 ml无菌甲烷，置于30 培养，每天测定甲烷含量。 取20 g过筛土壤A装入120 ml血清瓶中，用异丁基胶塞密封，121加压蒸汽灭菌 min，与对照（不灭菌）加入0.5 ml无菌甲烷，每测定甲烷含量。 取20 g过筛土壤A装入120 ml血清瓶中，分别加入0.5 g纤维素、葡萄糖和甲醇；同时设一对照，在4个处理中分别加入0.5 ml无菌甲烷，并每测定甲烷含量。 取20 g过筛土于120 ml血清瓶中，分别加入不同浓度甲醇，使其浓度分别为148.1 μmolg鲜土(a)、49.4 μmolg鲜土(b)和24.7 μmolg鲜土(c)。置于30 培养每天测定甲烷含量。 .3 甲烷测定 采用带有氢火焰离子检测器（FID）的102G型气相色谱仪，2.0 m不锈钢柱，担体为GDX-502，柱温40 ，载气N2）流速20 mlmin，H2流速80 mlmin，空气流速800 mlmin，进样量500 μl。 用外标法测定甲烷浓度。甲烷标准气体为北京氦普北分气体工业有限公司提供，纯度为99.999。 .4 甲烷氧化菌的分离 KNO3 1.0 g；MgSO4·7H2O 0.2 g；FeSO4·7H2O 0.001 g；Na2HPO4 0.21 g；KH2PO4 0.09 g；H2O 1000 ml；微量元素液 10 ml琼脂20 gpH 6.8。 微量元素液组成：CuSO4·5H2O 0.01 gH3BO3 0.1 g；MnSO4·5H2O 0.01 g；ZnSO4·7H2O 0.1 g；NaMoO4 0.01 g；H2O 1000 ml。 1.4.2 富集、分离和纯化 取土壤3 g于盛有20 ml的甲烷氧化菌培养液120 ml的血清瓶中，用异丁基胶塞密封，加入5 ml甲烷，置于32 下富集培养15 d。再转接培养，至肉眼可见培养液浑浊。 经多次富集后得到浑浊菌液，进行滚管（好氧）分离，滚管后再在试管中注入无菌纯甲烷气体，32 培养至有单菌落出现。用毛细管挑取单菌落，转入无机盐液体培养基中并以甲烷为唯一碳源进行培养，培养后再进行滚管分离，如此重复多次得到纯化的分离物。 在盛有20 ml培养基的120 ml血清瓶中接入1 ml菌悬液，分别加入×10-3的甲醇×10-2的甲烷。对照中无任何碳源，各处理重复3次。置于32 培养，每隔一定时间测定OD600值。 结果与讨论 .1 不同大棚土壤的甲烷氧化活性 两种