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GE Healthcare
利用PreDictor板高通量筛选Capto
MMC的洗脱条件
Carina Engstrand, Tryggve Bergander and Karol Lacki
瑞典乌普萨拉 通用电气医疗集团生命科学部
简介 表1. 此研究中所测定的因素、相关范围和反应
生物制药行业的需求增加以及时间和费用的限制为早期工 因素 范围 反应
艺开发中的传统层析柱带来了挑战。层析条件的高通量筛 第 一 次 洗 脱
选能大幅度降低此过程所需的时间和样品量。本文描述了 盐浓度 0.25 、 1.00 、 (板)或3 倍柱
1.75 M 体积(柱)的回
PreDictor™板(预装了层析填料的96孔过滤板)在平行筛 收率
选多模式阳离子交换填料Capto™ MMC的洗脱条件上的应 盐类型 NaCl 或 NH Cl
4
用,其中利用了统计学的Design of Experiments (DoE)。并 缓冲液离子强 0.026 、0.163 、
1
将结果与层析柱所产生的数据进行了比较。同时比较了两 度(BIS) 0.300 M
2 5.75 、 6.25 、
种不同形式下开展研究所需的时间和样品。 pH 6.75
实验方法 1 在不同的离子强度下,用Henderson-Hasselbach等式计算而
来,未校正pKa偏移。通过加入氢氧化钠而获得。
在此次洗脱研究中,利用DoE (MODDE™, 8.0版)改变了缓 2 使用的缓冲液为丙二酸钠(pH 5.75和6.25 ),磷酸钠(pH
冲液离子强度(BIS)、pH和两种洗脱盐的浓度,表1列出了 6.75 )。
一系列条件。
材料与方法
从理论上说,PreDictor板的孔中发生的分批吸附/解吸所涉
及到的物质传递原理与柱层析相同 (1) 。为了验证来自 原型PreDictor Capto MMC板的每个孔装入6 μl层析填料,用
PreDictor板的数据与柱层析的数据有着相同的定性信息, 于研究牛血清白蛋白(BSA)的洗脱条件。平衡缓冲液为
在Tricorn™ 5/100柱(柱体积为2 ml)中进行了相关的研 50 mM 乙酸钠,250 mM NaCl ,pH 4.75。利用真空管来去
究。 除板中的液体。
实验设计
对于实验设计,选择了表1中所列的因素和反应。根据
MODDE中的RED-MUP设计来完成PreDictor板的实验设计。
这是一个多水平的全因子设计,以便解析主要、互动和曲
率作用。柱实验设计和评估所使用的软件是MODDE 7.0
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