骨髓基质细胞培育和体外成骨研究.pdfVIP

( ) ·238 · Ch ine se J R ep arat ive and R econ struct ive Su rgery, 1997, V o l 11 4 骨髓基质细胞培养和体外成骨研究 1 1 1 1 2 刘劲松 　 曾才铭 　王宏邦 　李世和 　贾　伟 　　摘　要　　为研究骨髓基质细胞在体外培养条件下的成骨能力, 将家兔骨髓细胞进行体外培 养。其中的造血细胞成分在一周内死亡或随换液而被清除。传代后改用含 10- 8 地塞米松和 m o l L 10 甘油磷酸钠的条件培养液, 经活体相差显微观察、四环素荧光标记、组织化学染色、 mm o l L 透射电镜、扫描电镜和X 线能谱等方法进行观测。结果显示, 传代细胞培养 15 天融合成单层后分 泌活动增强, 培养 20 天后细胞形成多层结构, 并聚集成多个散在的不透光结节。这些细胞的AL P 染色呈强阳性, 结节的四环素荧光标记、钙盐染色均呈强阳性, X 线能谱分析显示结节的主要组成 元素为钙和磷。确认培养的骨髓基质细胞具有与成骨细胞相似的形态特征和生物学特性, 并能在 体外形成钙化的新骨组织。 关键词　　骨髓　　基质细胞　　细胞培养　　成骨作用 50 , 青霉素 100 , 链霉素 100 ) 　　体外培养成骨细胞, 是研究骨代谢和成 C g m l U m l g m l 骨机理的重要手段。以往培养的成骨细胞多 稀释, 注射器反复抽吸, 制成细胞悬液。 取材于人和动物的骨组织和骨膜。近年来, 骨 1. 3　细胞培养 6 将上述细胞悬液以 1 ×10 的细胞密度分别 髓 的成骨潜能 已被越来越 多的实验所证 m l [ 1 ] 接种于 25 m l 培养瓶中, 置于 37 ℃ , 5% CO 2 及饱 明 。由于骨髓具有取材方便, 对供体部位损 ( 和湿度条件下培养 德 国H eraeu s 公司通气培养 伤小, 有流动性, 可经皮注射等优点, 临床用 ) 箱 , 隔日换液。至细胞长满后, 用 0. 25% 胰蛋白酶 [2 ] 于治疗骨缺损、骨不连等已取得良好疗效 。