HSF-1 在 HMGB1 引起的TNF-α的表达中的作用.docVIP

  HSF-1 在 HMGB1 引起的 TNF-α 的表达中 的作用# 李杉珊，尹朝奇，罗成群，贺全勇，周建大，卜平元，朱颉，彭晨，彭浩， 5 10 15 20 25 30 35 40 徐丹** （中南大学湘雅三医院烧伤整形外科，长沙 410013） 摘要：目的 观察热休克转录因子 1 在高迁移率族蛋白 1 引起的炎症反应中的表达及作用。 方法 HMGB1(0-1000ng/ml)作用于 RAW264.7 细胞后于指定时间收集细胞上清，酶联免疫吸 附法测定 TNF-α 水平以观察 HMGB1 引起 TNF-α 表达的时效及量效关系。免疫荧光法检测 HMGB1 引起的 NF-κB 核转移。蛋白免疫印迹法检测 HMGB1 引起的 HSF-1 表达。应用反 义 RNA 沉默 HSF-1 的表达后，检测其对 HMGB1 诱导的 TNF-α 表达的影响。结果 （1） HMGB1 作用与细胞后 4h, 12342.4±467.4 pg/ml 及 12h, 19568.3±569.2 pg/ml 出现两次分泌高 峰（P<0.01，F=1342.7）；TNF-α 的表达随 HMGB1 使用量的增加而增加（P<0.01，F=1023.3）。 （2）HMGB1 可以引起 NF-κB 的核转移。HMGB 作用后 NF-κB 位于胞核中的阳性率 0h: 5.2±0.2%，0.5h: 32.2±2.3%，1h:89.3±5.2%，（P<0.05,F=15.2）。(3) HMGB1 可以引起 HSF-1 表达的增加，0.675±0.022 vs 0.430±0.030, （P<0.05, t=10.8）。（4）应用 siRNA 抑制 HSF-1 的表达后，HMGB1 诱导产生更大剂量的 TNF-α，14470.3±432.7pg/ml vs 19388.5±557.6pg/ml, （P<0.05, t=15.6）。结论 HMGB1 作用于 RAW264.6 细胞后 4h 和 12h 出现两次分泌高峰； TNF-α 的表达随 HMGB1 使用量的增加而增加；HMGB1 可以引起 NF-κB 的核转移；HMGB1 可以上调 HSF-1 的表达；HSF-1 抑制了 HMGB1 诱导的 TNF-α 表达。 关键词：烧伤外科；高迁移率族蛋白 1；热休克转录因子 1；炎症反应 中图分类号：R644 The effect of HSF-1 in the expression of TNF-α induced by HMGB1 Li Shanshan, Yin Chaoqi, Luo Chengqun, He Quanyong, Zhou Jianda, Bu Pingyuan, Zhu Jie, Peng Chen, Peng Hao, Xu Dan (Department of Burns and Plastic, the 3rd Xiangya Hospital, Central South University, ChangSha 410013) Abstract: Objective To observe the expression of heat shock transcription factor 1 in inflammation induced by high mobility group protein B1 and explain its effect.Methods RAW264.7 cell were stimulated with HMGB1 (0-1000ng/ml), and the supernatant was assayed for TNF-α by ELISA at the indicated time after stimulation to observe the HMGB1 time-dependent and does-dependent stimulation of TNF-α. Translocation of NF-κB was observed by immunofluorescence. Expressions of HSF-1 in cell lysates were detected by Western blot. Cell were transfected by siRNA then stimulated with HMGB1, and the supernatant was assayed for TNF-α by ELISA. Results (1) Peaks of TNF-α were observed 4h and 12h after stimulation of HMGB1(123