经超顺磁性氧化铁标记的自体BMSCs在兔椎间盘内存活时间研究.pdfVIP

中国修复重建外科杂志2009年 】】月第23卷第 l】期 · l355 · 经超顺磁性氧化铁标记的自体BMSCs在 兔椎间盘内存活时间研究 谭树森 贾长青 刘振宁 刘瑞端 杨杰 张磊 寿奋勇 鞠晓军 【摘 要】 目的 观察超顺磁性氧化铁 (superparamagnetieironoxide，SPIO)标记的 自体BMSCs在兔椎间盘内 的存活时间，为后期采用转染成功的BMSCs预防椎间盘退变提供依据，并观察其迁移规律。 方法 8～ 1O周龄 日本大 耳白兔 12只，雌雄不限，体重 1．5～2．0kg，取4mL骨髓密度梯度离心法行 BMSCs分离、培养。取第3代BMSCs(1× 10个)用 SPIO (25~tg／mL)标记，普鲁士蓝铁染色检测标记效率，透射 电镜观察标记细胞，锥虫蓝染色鉴定标记细胞活力， MTT法测定标记细胞及未标记细胞增殖，并绘制生长 曲线。将 12只兔随机分为实验组 (n=8)和对照组 (=4)，分别于L、：、 Lz、3、L 、L 、 s注入标记和未标记 自体BMSCs悬液 20 (细胞浓度均为5x105个 ／mL)，术后2、4、6、8周实验组和对 照组分别取 2只和 1只动物处死，取相应椎问盘行普鲁士蓝铁染色观察细胞是否存活以及分布。 结果 第3代BMSCs 经 SPIO标记后，普鲁士蓝铁染色标记效率为95．65％-4-1．06％；透射电镜观察示细胞质内有电子高密度铁颗粒；锥虫蓝染 色示细胞活力为98．28％士0．85％；MTT检测显示7d内未标记细胞组和标记细胞组间细胞增殖比较差异无统计学意义 (尸0．05)。实验组细胞移植术后 8周，仍可观测到位于细胞质 内的蓝染颗粒。对照组未见蓝染颗粒。 结论 sPIO可 以安全、有效地标记BMSCs，并能在体内持续存活 8周。 【关键词】 BMSCs 超顺磁性氧化铁标记 细胞移植 细胞迁移 椎间盘退变 兔 中图分类号：Q813 R681．5 文献标志码：A STUDY 0N SURVIVALTlME OFAUTOGENElC BMSCsLABELEDW ITH SUPERPARAMAGNETlC lRON OXIDE INRABBITINTERVERTEBRALDISCS~TANShusen，11．4Changqinf，L，uZhenninf，LIURuiduan，YANGlie，ZHANG Lei2 , SHOUFenyonge,lUXiaojunlDepartmentofOrthopaedics，Shen~ingHospital,ChinaMedicalUniversity,ShenyangLiaoning, 110001，P．R．China；TissueEngineeringLaboratoryofChinaMedicalUniversity．Correspondingauthor：JIAChangqing,E—mail： jiachqzh@sina．corn [Abstract] 0bjective ToexplorerthesurvivaltimeofautogeneicBMSCslabeledbysuperparamagneticironoxide (SPIO)inrabbitintervertebraldiscsandtheruleofmigrationsoastoprovebasesofgenetherapypreventingintervertebraldisc degeneration． Methods Twelverabbitswereusedinthisexperiment，aged8-10weeks，weighing1．5—2．0kgandneglectingtheir gender．