1.1双虎清肝颗粒在体内对鸭乙肝病毒感染的治疗作用.docVIP

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医学

1.1双虎清肝颗粒在体内对鸭乙肝病毒感染的治疗作用 摘 要:本试验用一日龄北京鸭,静脉注射乙型肝炎病毒,7天后开始给药,共给10天,观察双虎清颗粒对DHBV感染鸭血清DHBV-DNA的作用,三次试验结果表明:双虎清肝颗粒5、7.5g/kg剂量能抑制鸭血清中DHBV-DNA的复制,与给药前比较差异显著(P<0.05),抑制率可达59-94%,其抑制作用优于乙肝清热解毒冲剂。 关键词:双虎清肝颗粒 鸭乙型肝炎病毒 材料和方法: 药物:双虎清肝颗粒,提取浸膏,每克含生药4克,中国中医研究院产品,批号880701。乙肝清热解毒冲剂,本溪第三制药厂产品,每克冲剂含生药0.8克。 2、 病毒: 鸭乙型肝炎病毒(DHBV),鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA),强阳性血清,采自上海麻鸭,-70℃保存。 动物: 一日龄北京鸭,购自北京禽蛋养鸭场。 试剂 a-32P-dCTP购自北京福瑞生物技术工程公司,进口翻译药盒,购自普洛麦格公司(PromegaCo.).SephadesG-50,Ficoll PVP购自瑞典Pharmacia公司,SDS西德Merck公司产品,鱼精DNA,牛血清白蛋白为中国科学院生物物理研究所产品,硝酸纤维素膜0.45um,Amersham公司产品。 5、分组与给药剂量: 试剂分三个组:1)阴性对照阴,即病毒感染对照组,给生理盐水:2)阳性对照组,给乙肝清热解毒冲剂,剂量为5和7.5g/kg(生药)。 试验方法:试验共做了三批,每批试验分三个组,即阴性对照组,阳性对照组及双虎清肝颗粒对照组,每组5只鸭子。 一日龄北京鸭,经腿胫静脉注射DHBV-DBA阳性血清0.2ml/只,在感染后7天分三个组,按上述剂量灌胃给药或生理盐水治疗,共10天,第一、第二批试验阳性对照药乙肝清热冲剂和双虎清肝颗粒给药剂量均为5g/kg(2.5g/次,2次/日),第三批试验各给7.5g/kg(2.5g/k)/次,3次/日),阴性对照组给同何种生理盐水。 在感染后第7天即给药前(T0)、给药后第4天(T4)、7天(T7)、10天(T10)和停药后3天(P3),自鸭腿静脉取血,分离血清,-70℃保存待检测。 检测方法:取上述待检鸭血清,每批同时点膜,测定鸭血清中DHBV-DNA水平的动态。按进口试剂翻译盒说明书方法,用32P标记DHBV-DNA探针,作鸭血清斑点杂交,放射自显影膜片斑点,在酶标检测仪测定OD值作为标本DHBV-DNA水平值。 7、药效计算: 1)计算每组鸭不同时间(T0、T4、T7 、T10 、P3)血清DNA的OD值均值(±SD),并将每组鸭用药后不同时间与同组给药前(T0)比较,经T检验分析差异的显著性。 2)按下式计算每组鸭用治疗后不同时间血清DHBV-DNA抑制率(%)。 给药前(T0)DNA的OD值-给药后DNA的OD值 DNA的抑制率(%)= X100% 给药前DNA的OD值 结 果 三批试验结果见表1、2、3。 表1 双虎清肝颗粒对DHBV-DNA感染鸭的治疗作用(1)(n=5) 剂量 组别 (g/kg) 血清DHBV-DNA水平 T0 OD值 T4 OD值 抑制率(%) T7 OD值 抑制率(%) 阴性对照 2.8±1.1 3.2±1.3 -14.3 3.0±0.7 -1.7 阳性对照 5 4.0±0 2.2±1.1※ 45 3.2±1.3 20 双虎清肝颗粒 5 3.8±0.5 2.4±1.5 36.8 1.8±1.3※ 52.6 血清DHBV-DNA水平 剂量 组别 (g/kg) T10 OD值 抑制率(%) P3 OD值 抑制率(%) 阴性对照 3.8±0.5 -35.7 2.8±0 0 阳性对照 5 2.5±1.5 37.5 2.8±1.3 30.0 双虎清肝颗粒 5 1.6±1.5※ 57.9 1.8±2.1 52.6 注:※P<0.05 表2 双虎清肝颗粒对DHBV-DNA感染鸭的治疗作用(2) (n=5) 血清DHBV-DNA水平 剂量 组别 g/kg T0 T4 T7 T10 OD值 OD值 抑制率(%) OD值 抑制率(%) OD值 抑制率(%) 阴性对照 4.0±0.0 3.6±0.9 10.0 3.6±10.0 10.0 3.2±0.5 20.0 阳性对照 5 3.0±1.2 2.8±1.1 6.7 3.8±0.4 -26.7 3.4±0.9 13.3 双虎清肝颗粒 5 3.4±

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