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添加柠檬酸促进粘质沙雷氏菌发酵产过氧化氢酶 贺仁艳 ，蔡宇杰 ，廖祥儒 ，李婷婷 ，张大兵 1(江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏 无锡，214122) 2(江苏汉邦科技有限公司，江苏 淮安，223001) 摘 要 在优化 1株粘质沙雷氏菌发酵产过氧化氢酶 (CAT)的培养基成分时发现，柠檬酸可以显著提高该茵胞 内CAT的活力。结合先前报道，探究了柠檬酸促进粘质沙雷氏菌合成胞 内CAT的原因。以等摩尔碳含量的柠 檬酸、葡萄糖、柠檬酸与葡萄糖 的混合物分别作为碳源 ，测定 了在不 同碳源发酵产 CAT时粘质沙雷 氏菌胞 内抗 氧化 的相关数据。结果显示 ：添加柠檬酸(20g／L)后 ，该菌细胞 内H0 和羟 自由基含量均 比对照组(葡萄糖) 高，说 明柠檬酸代谢物对其产生 了活性氧胁迫，进而诱导更多 CAT的合成。考察 了甲萘醌和百草枯 (活性氧 O ·的来源物)对该菌合成 CAT的影响，实验结果验证 了适量 的活性氧能够诱导该菌合成 CAT的结论 。 关键词 过氧化氢酶，柠檬酸代谢，氧化胁迫，粘质沙雷氏菌 过 氧 化 氢 酶 (catalase，EC 1．11．1．6，简 称 氏菌合成胞内CAT是否与氧化胁迫相关，从而为提 CAT)，是一类以过氧化氢为专一底物 ，通过催化一对 高微生物发酵法生产 CAT提供一些理论依据。 电子的转移而最终将其降解为水和氧气的酶，它是生 1 材料与方法 物演化过程 中建立起来的生物 防御系统的关键酶之 一 ， 在食品、医药 、纺织 、造纸 、环保等行业 已 1．1 菌种 经得到了重要的应用 。 粘质沙雷 氏菌 (Serratiamarcescens)SYBCT02、 过氧化氢酶的生产方法主要有生物材料提取法 SYBC08、SYBCYH均为本实验室筛选所得，保存于 和微生物发酵法 ，微生物发酵法由于具有不受原料来 4cI=冰箱中。 源限制 、易规模化生产等优点而备受关注 。为 了 1．2 试剂 提高微生物发酵法生产 CAT的酶活力 ，许多研究者 总抗氧化力试剂盒、过氧化氢 (H：O：)试剂盒 、丙 从过氧化氢酶在细胞 内的生理功能出发 ，对 CAT的 二醛 (MDA)试剂盒 、羟 自由基试剂盒 ，抗坏血酸 微生物发酵条件进行 了优化。研究发现 ，CAT作为 (Vc)试剂盒、超氧化物歧化酶 (SOD)试剂盒 ，由南京 专一清除微生物体 内多余 HO：的抗氧化物酶，其合 建成生物工程研究所提供。实验所用其他试剂均为 成受到与 HO 相关 的活性氧诱导 ，外加 乙醇、过氧化 国产分析纯。 氢、甲萘醌等可以显著地促进微生物合成 CAT 。 1．3 培养基 在优化 1株粘质沙雷氏菌发酵产 CAT的培养基 斜面培养基 (g／L)：酵母粉 5．0，蛋 白胨 10．0， 成分时，作者发现柠檬酸可 以显著提高该菌胞 内 NaC110．0，琼脂 15．0，pH7．0。 CAT的酶活力。之前 ，Mailloux等发现柠檬酸代谢产 种子培养基 (g／L)：斜面培养基不加琼脂 。 物参与调节细胞对氧化胁迫的防御 ，He等认为柠 发酵基础培养基 (g／L)：玉米浆粉20．0，葡萄糖 檬酸代谢产物可能作为代谢信号影响细胞对氧化胁 5．0，pH7．0。实验 中培养基的葡萄糖含量依据实验 迫的响应 。基于上述原 因，实验 中以等摩尔碳含 设计做 出相应调整。 量的柠檬酸 、葡萄糖 、柠檬酸与葡萄糖 的混合物分别 1．4 培养方法 作为碳源，测定 了在不 同碳源发酵产 CAT时粘质沙 1．4．1 种子培养 雷氏菌胞 内的抗氧化能力 ，探究