丹参提高胸水肿瘤浸润淋巴细胞杀瘤作用的研究及其超微结构.pdfVIP

维普资讯 中国中医药科技 2005年 1月第 12卷第 1期 Jan．2O(OVo1．1No．1 · 中药研究与开发 · 丹参提高胸水肿瘤浸润淋巴细胞杀瘤作用的研究 及 其 超 微 结 构 的 改 变 陈良良 陈卫星 吴良村 李庆霞 沈敏鹤 (浙江中医学院附属医院 ·杭州310006 浙江大学附属第一医院 ·杭州310009) 摘 要 目的：观察丹参注射液提高胸水肿瘤浸润淋巴细胞的杀瘤作用及其超微结构改变。方法 ：从癌症 患者恶性胸水中分离获取 IlL和 自体瘤细胞，体外培养观察丹参注射液对IlL体外长期存活，扩增及抗肿 瘤作用的影响，并着重观察了其杀瘤作用的形态超微结构改变过程。结果：丹参注射液可使 IlL体外长期 存活。扩增后的TIL在体内外的抗肿瘤活性均明显增强，作用类似 IL一2。光电镜观察到扩增后 的IlL与 自体瘤细胞共同培养具有使癌细胞裂解作用。结论：功能和形态二方面证实丹参注射液具有 明确的抗肿 瘤免疫作用，是较为理想的替代细胞 因子、辅助 IlL细胞过程免疫治疗恶性肿瘤的免疫调节荆。 主题词 肺肿瘤／中医药疗法 丹参／治疗应用 淋 巴细胞，肿瘤浸润／免疫学 淋 巴细胞，肿瘤浸润／超微 结构 胸水 体 外研 究 @动态观察 肿瘤浸润淋巴细胞 (TIL)杀伤肿瘤细胞通过两种机制 ： 打)得火柴头大小细胞 团，缓慢滴入 2—5％戊二醛 ，静置 固 一 是 TIL与肿瘤细胞相互接触 ，直接分泌细胞毒颗粒和穿孔 定，取出凝块切成 1舢 3小块 ，缓冲液漂洗，1％锇酸后 固定， 素与肿瘤靶细胞结合，使肿瘤细胞裂解 ；二是分泌具有细胞 乙醇和丙酮递增浓度脱水，环氧树脂包埋 ，超薄切片经醋酸 毒功能的细胞因子 ，如肿瘤坏死 因子 ，干扰素介导的间接杀 铀和枸橼酸铅染色后 ，用透射电镜观察。 伤作用。丹参有一定的免疫调节作用 ，我们发现丹参对 IlL 2 实验结果 有较好的扩增作用，并在体外持续保持较高的增殖能力，同 2．1 TIL的体外生存和纯化 单纯用培养剂培养的IlL在 1 时抗肿瘤活性明显增强 1J，在此基础上，本文对丹参提高 IlL 周内即相继变性死亡，加入丹参或 IL一2组，其 IlL生长 良 杀伤瘤细胞的作用及其形态学改变作进一步报道 。 好 ，持续扩增且在 7—9d后趋于纯化 ，存活时间 17d。用细 1 材料与方法 胞涂片HE染色显示，刚分离的 IlL数量少且混有瘤细胞和 1．1 效应细胞与靶细胞的分离获取 实验试剂和材料见文 大量红细胞 (病人常是血性胸水)(图 1)；药物组培养后 IlL 献 11．，方法参照文献l21，无菌获取晚期肺癌未行放化疗患者 明显增多趋于纯化 (图2)部分 IlL变大变圆，红细胞消失 ，瘤 的恶性胸水 ，1500r／m×10rain，离心弃大部分上清液 ，得细胞 细胞明显减少趋于消失。两组药物情况相仿。 悬液 。置于底层 比重为 1077的 100％淋 巴细胞分离液 ，上 层为 1640培养液稀释 的比重为 1055的 75％淋巴细胞分离 液的液面上。2000r／m×20rain，离心。在第 2层和第 4层液 面即可获得较纯的IlL和 自体瘤细胞，分别经洗涤后培养、 传代，TIL加入丹参注射液 (240mg／m1)或 IL一2(1000u／m1)进 图 1 丹参培养前 11L细胞 图2 丹参培养后TIL细胞 行纯化扩增。 (光镜 ×400倍) (光镜 ×400倍) 12 丹参促进 IlL杀伤瘤细胞的活性测定 将丹参培养纯 化扩增的TIL作为效应细胞(2×106／m1)，自体瘤细胞和 22 IlL体外杀瘤活性的改变 见表 1。 表 1 丹参培养后 11L杀