斑马鱼Zar1和Zar1-like基因的克隆及其表达分析.pdfVIP

第35卷 第4期 水 生 生 物 学 报 Vo1．35．NO．4 2011年 7月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA July， 20 11 D0I：10．3724／S J．1035．20l1．00572 斑马鱼Zarl和Zar1．1ike基因的克隆及其表达分析 江文波 赵冬梅 胡 炜2 赵浩斌 (1．华中师范大学生命科学学院，湖北省遗传调控与整合生物学重点实验室 武汉 430079； 2．中国科学院水生生物研究所，淡水生态与生物技术国家重点实验室 武汉 430072) 摘要：合子阻滞基因 1(Zygotearrest1，Zar1)及Zarl—like(ZarlL)作为母源基因，在小鼠卵子一合子转变过程 中发挥着极其重要 的作用。研究以斑马鱼为对象，采用 cDNA末端快速克隆(RACE)技术获得了ZarlLcDNA 全长，并采用 RT-PCR技术检测 Zarl和ZarlL在斑马鱼不同组织器官、卯母细胞和胚胎发育时期的表达情 况。ZarlLcDNA的全长为 1146bp，编码 311个氨基酸残基，5非编码区20bp，3啡编码区 190bp。多重序列 比对结果显示，C．末端的序列非常保守，相似性高达 74％，具有非典型的PHD基序(Planthomeodomain)，并 具有两个 C4类型的锌指结构。在基因结构上，Zarl和ZarlL均由四个外显子构成，两个基因的每一个外显 子在大小上也 比较相近。分子进化表明斑马鱼Zarl和 ZarlL属于两个不同的基因，可能是同一来源的祖先 基因重复和进化的结果。RT．PCR结果表明斑马鱼 Zarl和ZarlL的表达模式相似，都是卵巢特异表达基因， 在卵母细胞及早期胚胎中可检测到大量转录本的存在，囊胚、原肠胚期后下降，但在整个胚胎发育期都可检 测到转录本。斑马鱼Zarl和ZarlLmRNA的表达水平的一致性，似乎暗示着两个基因的功能基本一致 。表 达模式分析表明Zarl和ZarlL可能与斑马鱼卵子一合子转变有关，也可能与其他的胚胎发育过程有关。 关键词：斑马鱼；Zar1；ZarlL；母体．合子转变；基因克隆；表达模式 中图分类号：Q344 文献标识码：A 文章编号：1000—3207(2011)04—0572．06 目前，大量卵母细胞特异的母性效应基因在脊 蛙、斑马鱼、河豚等已得到克隆。小鼠中的基因敲 椎动物中发现，这些基因富集于卵母细胞 中，在减 除显示这些基因都在胚胎发育的早期、特别是在 1 数分裂和受精过程 的完成中起重要作用，为胚胎提 细胞期向2细胞期的转变过程(MzT)中起作用[3]。 供早期发育所需的蛋 白质和调控 因子 。它们在胚胎 Zarl是卵母细胞特异的母性效应基因，是第一 发育的早期发挥重要作用，一直持续到合子基因起 个被发现在卵母细胞向合子的转变过程 中起重要作 始转录和发挥作用。一些母源基 因还提供生殖细胞 用的基因_5，6]。纯合子 Zar1一null(Zarl1母性小鼠不 发育所需的特异因子，是生殖细胞发育所必需，如 育，由这些个体产生的卵子得到的胚胎发育阻滞于 vasa、 nanos “ 1细胞期_5】。ZarlL(或称Zar2)与Zarl在蛋 白质结构 。 从母源基因向合子基因转录表达 的过渡称为母体．合子转变或卵子．合子转变(Matema1． 上相似，但位于不同染色体上[]。小鼠 ， 与 zygotictransition，MZT)。这时母源的蛋 白质和 RNA Zar1表达模式相同，ZarlL活性的抑制也导致胚胎 逐渐降解消失，取而代之的是合子 自身基因的转录 的2．细胞阻滞_1…。 和表达 。在鱼类和两栖类，这一过程称之为中囊胚 虽然 Zarl与Zarl