Let-7d表达质粒构建及其对卵巢癌细胞高迁移率A2蛋白及.pdfVIP

·1752 · 南方医科大学学报（J South Med Univ ） 2012;32(12) 基础研究 Let-7d 表达质粒的构建及其对卵巢癌细胞高迁移率A2 蛋白及 ras 蛋白表达的抑制作用 1 1 2 2 3 叶海燕 ，陈建国 ，黄小穗 ，郭爱林 ，郝佩佩 1 2 3 广东省人民医院//广东省医学科学院 妇科，医学研究中心，广东 广州 510080；南方医科大学生物技术学院 生物技术系暨分子免疫学研究所，广东 广州 510515 摘要：目的构建let-7d 真核表达载体，研究let-7d 对卵巢癌细胞生物学行为及蛋白表达的影响。方法根据let-7d 序列设计合成 microRNA 片段，定向克隆到pcDNATM6.2GW/EmGFPmiR 真核表达载体上，运用基因转染技术将其导入卵巢癌IGROV 1细胞 中，使let-7d 基因过表达，以实时荧光定量PCR 验证let-7d及高迁移率A2（HMGA2）基因的表达，并用Western blotting 检测相关 蛋白HMGA2 的差异表达。以MTT 绘制细胞生长曲线，流式细胞术检测细胞凋亡率，分析let-7d 对IGROV 1细胞增殖生长的影 响。结果成功构建针对靶向let-7d 的表达质粒，将表达质粒转染人卵巢癌IGROV 1细胞后，明显下调HMGA2 的表达水平，而 下调ras 蛋白的作用较弱，没有前者明显。细胞表型研究显示，抑制HMGA2 表达可能改变该细胞的恶性表型，表现在细胞增殖 能力明显下降，自发凋亡率明显增加等。结论 Let-7d 通过对HMGA2 的调控，在改变卵巢癌IGROV 1细胞恶性表型方面可能 起重要作用。 关键词：let-7 ；卵巢癌；高迁移率蛋白A2 ；ras 中图分类号：R34 ；R737.31 文献标志码：A 文章编号：1673-4254（2012）12-1752-06 doi: 10.3969/j.issn. 1673-4254.2012.12.015 Construction of let-7d expression vector and its inhibitory effect on HMGA2 and ras expression in human ovarian cancer cells in vitro 1 1 2 2 3 YE Haiyan , CHEN Jianguo , HUANG Xiaosui , GUO Ailin , HAO Peipei 1 2 Department of Gynecology , Medical Research Center , Guangdong General Hospital, Guangdong Academy of Medical Sciences, Guangzhou 510080, China; 3Institute of Molecular Immunology, School of Biotechnology, Southern Medical University, Guangzhou 510515, China Abstract: Objective To elucidate the role of let-7d in regulating the biological behavior of ovarian cancer cells and their expressions of HMGA2 and ras proteins. Methods The pre-let-7d sequence was synthesized and inserted into