ELISA方法检测犬瘟热抗体初探.pdfVIP

2012年第 24期 中国饲料 ELISA方法检测犬瘟热抗体初探 吉林农业大学发展学院 刘 蓓 高瑞峰 宋继伟 摘【要】本实验以细胞培养犬瘟热病毒作为包被抗原，建立 了检测犬瘟热病毒血清抗体的间接 ELISA方法。该检 测方法抗原最佳包被浓度为 5p~g／mL，血清最佳稀释度为 1：100。阻断实验、敏感性实验等结果表 明该方法特异性强、 重复性较好 ．可用于犬瘟热血清抗体 的定量和定性检测。 f关键词1犬瘟热病毒 ；间接 ELISA；抗体检测 【中图分类号】$816．17 [文献标识码]A [文章编号】1004—3314(20l2)24—0033—03 A【bstract]AnindirectELISAmethodfordetectingantibodiesofcaninedistempervirus(CDV)wasestablishedwith theantigencaninedistempervirus (CDV)fromthecellculture．Theoptimalconcentrationofantigenwas5txgm／Landthe dilutionofserum was1：100．Thismethodwasconfirmedtohavebetterrepetitivenessandspecificitybyblockingandsensi— tiretest．Itcouldbeusedforquantitativeandqualitativedetectionontheserum antibodiesof CDV． K【eywords]caninedistempervirus；indirectELISA；antibodydetecting 犬瘟热是 由犬瘟热病毒 (CDV)引起的犬及其 物酶 (HRP)结合物 (sigma公司)，工作效价 1： 他食肉动物的一种急性、高度传染性、致死性疫 5000：CDV 阳性血清为本实验室 自制 ，CDV阴性 病。该病临床症状 以结膜炎、双相热、严重的胃肠 血清为未免疫貉子血清 ；CDVOnderstepoort株 、 炎及神经症状等为主要特征 (Beineke等，2009)。 Vero细胞本室保存 ：羊抗犬免疫球蛋 白辣根过氧 犬瘟热可对世界范围的犬类造成严重的危害 ，尽 化物酶 (HRP)结合物 ，购 自Sigma公司，工作效价 管全世界针对该疫病都进行免疫 ．但是CDV仍然 1：5000；TMB为 Sigma公司(美国)产品。 对犬有极高的发病率和致死率 。通过血清中抗体 1．1．2 主要仪器 SUNRISE型酶联免疫检测仪 。 水平的升高 ．可以区分感染与未感染的动物。因 瑞士Tecan公司生产 ；ND一1000全波长／可见光扫 此 ．检测动物机体血清 中抗体滴度 ，对于决定是否 描分光光度计 。美 国NanoDrop公司生产。 需要免疫是一种有效的方法 。目前 ，检测动物血清 1．2 方 法 中CDV抗体水平主要应用间接免疫荧光实验 (I— 1．2．1 间接 ELISA工作条件 的初步确定 按常 FA)和血清中和实验 (SN)，这两种方法均存在操 规方法 ．建立ELISA的程序：用 pH9．6的0．05mol／L 作费时费力、对操作人员及仪器要求较高等缺点， 碳酸盐缓冲液稀释 CDV抗原至工作浓度 (1： 因此迫切需要研究出一种操作快速简便且特异 、 100)，0．1mL／孔 ，包被板 ，37℃包被 3h，4CiC包被 灵敏度高 的检测方法 。本研究用细胞培养的犬瘟 18h．用含 O．05％Tween一20的PBST洗板 5次 ， 热病毒作为包被抗原 ，建立了检测犬瘟热抗体的 每次 1rain。加含 5％脱脂乳的封闭液 ，0．2m 孔 ， 间接 ELISA方法 为免疫犬群的抗体检测和犬瘟 37℃封 闭 1h，PBST洗板