CFSE标记人T细胞亚群增殖反应及其在病毒感染性疾病中的应用.pdfVIP

中 国 病 原 生 物 学 杂 志 2008年 12月 第3卷第 12期 JournalofPathogenBiology December2008， Vo1．3，No．12 ·881 · · 论著 · CFSE标记人 T细胞亚群增殖反应及其在 病毒感染性疾病中的应用* 彭巧丽，李海英，曹振环 ，田亚坤 ，陈新月，吴昊，计云霞～ (首都医科大学附属北京佑安医院，北京 100069) 【摘要】 目的 探讨应用流式细胞术和活体染料羧基荧光素二 乙酸盐琥珀酰亚胺酯 (CFSE)标记人 T细胞亚群增殖反 应 的方法学及其在病毒感染性疾病 中的应用价值 。 方法 用不 同浓度 的CFSE标记新鲜分离的人外周血单个核细胞 (PBMC)，分为未刺激组及刺激组 。未刺激组加入 CD28，刺激组加入CD28及不同浓度 PHA，将细胞培养 5～7d后进行 染色，采用流式细胞仪检测 ，观察 CFSE、PHA标记 的最佳浓度及最佳培养时间，采用 CellQuest软件及 ModFit软件分 析 T淋 巴细胞各亚群的增殖情况 ，并对两种分析方法进行 比较 ，在上述最佳实验条件下，采用相 同的实验方法分析 CMV-pp65肽刺激 CMV—IgG(+)HIA—A2(+)者外周血单个核细胞 (PBMC)后 T细胞亚群增殖情况 ； 结果 CFSE标 记人外周血单个核细胞 (PBMC)的最佳浓度是 0．5 mol／L，PHA的最佳刺激浓度为 2 g／ml，在此浓度下，最佳培养时 间为 6d，PHA刺激培养 6d后 T细胞各亚群 出现典型的增殖不 同步现象，经 CMV—pp65肽刺激后 CD8 T细胞 出现 明 显的增殖反应 ，采用 CellQuest及 ModFit软件联合分析 ，可实现淋 巴细胞增殖分析 的可视化及数量化 。 结论 CFSE 染色结合荧光抗体标记和流式细胞术是分析淋巴细胞增殖的有力工具，可以有效检测出病毒抗原刺激后T淋巴细胞各 亚群的增殖反应及增殖动力学，在探讨病毒感染性疾病的发病机制中具有重要价值。 【关键词】 T淋 巴细胞 ；CFSE；增殖反应 【中图分类号】 R511 【文献标识码】 A 【文章编号】 1673—5234(2008)12—0881—05 [JournalofPathogenBiology．2008Dec；3(12)：881—885．] Applicationoftheproliferativeresponseofhuman T lymphocytesubsetslabeledbyCFSE invirusinfec— tiousdiseases PENGQiao—li，LIHal—ying，CAOZhen—huan，TIAN Ya—kun，CHENXin—yue，WU Hao，JIYun—xia (BeijingYouanHospital，CapitalMedicalUniverity，Beijing100069，China) [Abstract] Objective Tostudythemethodologyofcombiningcarboxyf1uoresceindiacetatesuccinimidylester(CFSE) withflow cytometrytolabeltheproliferitiveresponseofhumanT lymphocytesubsetsanditsapplication invirusinfec— tiousdiseases． Methods Toselecttheoptimalconcentrationandculturetime，thefreshPBMC isolated from healthy subjectswerelabeledwithCFSEondifferentconcentratio