生物自显影法筛选白蔹醇提物抗菌活性开题报告.docVIP

开题报告 生物自显影法筛选白蔹醇提物抗菌活性 1 选题的背景和意义 2 相关研究的最新成果及动态 植物中的化学成分有数十种甚至数百种化合物, 但其中具有抗菌、杀菌活性成可能只有一种或几种, 为了开发利用植物杀菌、抗菌活性资源, 并从中获得有效分, 鉴定结构, 直至产业化应用, 今后需要在以下几个方面进行更深入的研究: (1) 加强杀菌、抗菌植物资源的调查研究。通过历年大规模药用植物调查, 我国药用植物的种数为8 000 种左右, 而作过抗菌、杀菌活性研究的植物仅仅涉及菊科、唇形科等十多个科植物, 尤其在一些偏远地区、山区中可能存在着较多与自然界协同进化的抗菌、杀菌植物资源。另外, 一些具有杀虫活性的植物资源也可以进行抗菌、杀菌活性方面研究。植物中具有抗菌、杀菌活性物质主要是香精油类即酯、醛、酮、酚和萜烯等。植物作为天然的化合物宝库, 其中的氨基酸、生物碱也可能具有抗菌、杀菌活性, 值得作为研究对象。 (2) 建立快速、准确的活性物质筛选方法。杀菌、抗菌活性物质筛选方法正确与否对发现新的化合物具有重要作用,在天然产物农药研究过程中, 常规的筛选方法难以对微量的分离物进行抗菌活性跟踪; 另外, 在对化合物进行抗菌活性测定时, 目前应用较多的是离体活性筛选, 这种方法有可能导致一些活性物质的漏筛。而植株筛选法通常是决定该化合物是否具有实际应用价值的有效方法, 在活性物质筛选中值得重视。由于天然产物研究本身没有固定的方法论, 所以需要根据每个研究对象的特点, 采用灵活的研究方法, 如科学合理的提取分离体系和检测方法, 同时要加强与生物学科、化学学科之间的交叉与合作, 这样才能推动植物源杀菌剂研究的深入发展。 (3) 植物源杀菌剂的产业化技术研究与应用。现今登记的植物源农药几乎都是杀虫剂, 而杀菌剂产品却甚少, 可见植物源杀菌剂的产业化还相当薄弱。为此, 第一, 要加快实验室的提取分离技术工厂化的步伐, 例如在实验室中采用超临界萃取技术提取活性成分; 第二, 可以利用生物技术如组织培养技术、细胞培养技术, 对植物资源进行快速繁殖, 满足工厂化对原材料的需求; 第三, 以实验室分离到的活性物质为先导化合物, 合成一系列的结构相似的化合物进行活性物质的结构优化, 获得高活性的化合物, 最后工厂化生产。 3 课题的研究内容及拟采取的研究方法、研究难点及预期达到的目标 本课题主要研究白蔹醇体外对以大肠杆菌为代表的革兰氏阴性菌和金黄色葡萄球菌为代表的革兰氏阳性菌的抗菌性能。 白蔹又名白根、猫儿卵,首载于《神农本草经》,归为下品。具有清热解毒、消肿散结、生肌止痛之功能。《中华人民共和国药典》2005 版收载的白蔹为葡萄科白蔹( A m pelopsis japonica ( Thunb. ) Makino) 的块根。为了进一步阐明白蔹的化学成分,为植物的深层开发提供依据,作者对白蔹的化学成分进行较为系统的研究,从其乙酸乙酯提取物中分离得到了8 个化合物,利用理化常数和波谱学方法( 1H-NMR、13C-NMR) 鉴定了它们的结构,分别为没食子酸 、原儿茶酸、龙胆酸、白藜芦醇、大黄素、羽扇豆醇、β 谷甾醇、胡萝卜苷 。 生物自显影是一种将薄层色谱分离和生物活性测定相结合的药物筛选方法， 具有操作简单、耗费低、灵敏度和专属性高等优点，是一种快速测定生物活性的方法。可用于对具有抗菌/真菌， 抑制胆碱酯酶以及清除自由基和抗氧化等活性的天然产物的筛选，可实现活性指导的提取分离。利用TLC生物自显影，可测定单体活性化合物的最小抑制浓度( MID)，通过与对照品的MID值比较，能够推测该化合物活性的强弱。此外，利用TLC生物自显影定性及定量的特征，还可对食物、水样及动物组织中抗生素残留量进行监测。 以中药白蔹为基础，通过利用生物自显影法来快速分析测试其醇提物对大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的抗菌性能 薄层层析-生物自显影法(TLC-Bioautography) 是近年来应用的一种将薄层层析和生物活性测定相结合的抗菌活性物质检测方法[7-9]。利用薄层色谱的分离能力将少量混合物(如植物提取物、微生物代谢产物等)在薄层板上通过展开剂展开后,使薄层板与含有供试微生物的培养基相接触,在一定条件下培养一段时间后,非活性部位会被生长出的供试微生物所覆盖而呈现背景色;活性部位由于抗菌成分的存在,指示微生物的生长受到抑制而呈现抑菌斑点,这样就可以初步了解混合物抗菌活性成分的相对极性,为活性单体化合物的分离提供依据。采用TLC-生物自显影法检测植物内生真菌提取物 中抗菌活性成分鲜见报道[7],本文在TLC-生物自显影的基础上结合细胞活力MTT测定方法,对种滇重楼内生真菌菌液和菌丝正丁醇提取物中抗菌活性成分进行了检测,为进一步分离纯化内生真菌中抗菌活性成分提供了依