具有α葡萄糖苷酶抑制活性的海绵共附生微生物及其活性产物的研究.pdf

具有0c一葡萄糖苷酶抑制活性的海绵共附生微生物 及其活性产物研究 摘 要 海绵共附生微生物是寻找和开发天然活性产物的重要来源之一，是研制糖尿病新型药 物(0【．葡萄糖苷酶抑制剂)的有效途径。 本研究通过建立0【．葡萄糖苷酶活性抑制剂筛选模型，对美国圣璜岛海域海绵的附生微 生物发酵产物进行活性筛选。其中，0【．葡萄糖苷酶活性测试体系是在96孔酶标板中进行， 基础上，优化筛选模型。结果表明，模型的最佳筛选条件：底物PNPG浓度为10mmol／L、 活性测试反应时间为25min，以及样品溶剂DMSO含量为2％V／V。 以0【．葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖作为阳性对照样品，利用上述优化后的抑制活性筛选 模型，对212株海绵微生物的粗提物样品进行筛选。结果表明：19株微生物的粗提物抑制 率大于50％；其中，对于抑制活性最高的5株菌的粗提物，在浓度为0．4、0．6或0．8rag／mE时， 进行16SrDNAi贝U序及分析，鉴定该菌株为坚强芽孢杆菌(Bacillusfirmus)。 本研究还对活性菌株Bacillus firmus的培养条件进行了优化。采用的单因素试验设计， 以培养时间，摇床转速，接种量作为分析因素；正交试验验设计L9(34)，以蛋白胨、酵母 膏、NaCl和pH值作为分析因素；从实验结果中确定适合菌株Bacillus firmus生长的最佳 条件。然后，对菌株进行批量发酵，收集到粗提物2．89，将其代谢产物通过硅胶薄层层析， 高效分析液相等方法分离纯化。其中，硅胶柱粗分得到的组分Fr．1和Fr．4具有很高的0【一 葡萄糖苷酶抑制活性，抑制率分别为35．5％、19．6％。对组分Fr．1作进一步的分离纯化， 化合物，主要成分是环二肽类和哌啶酮类物质，这为研制新型Cc．葡萄糖苷酶抑制剂提供了 有力的线索，对这两类物质有待作进一步的研究。 关键词：海绵共附生微生物；n．葡萄糖苷酶抑制剂；分离纯化；活性化合物 derivedfrommarine inhibitor 伐一glycosidase microorganisms sponge--associated Abstract ofnature for arethe source products Marine important microorganisms sponge．associated isa for newdiabetes inhibitor)· potentialwaydeveloping drug(0【。glycosidase pharmaceuticals．It is tosearchfor model Inthis inhibitoryactivityscreening built—up study,thea。glucosidase fromthe metabolite frommarine theactivecrudeextrac