微小隐孢子虫Cp735基因的克隆及原核表达.pdfVIP

吉林农业大学学报 2011，33(5)：567～570 http：／／xuebao．jlau．edu．cn JournalofJilinAgriculturalUniversity E—lnail：flndxb@ ．sina．corn 微小隐孢子虫 Cp735基 因的克隆及原核表达 范大为，肖 丹，张西臣，宫鹏涛，杨 举，李建华 吉林大学畜牧兽 医学院，长春 130062 摘 要 ：采用 PCR方法从微小 隐孢子虫基 因组 中扩增 cp735基 因。与 pMD一18T载体连接后，挑取 阳性重组子 测序分析。用基 因重组技术将 Cp735基 因克隆八原核表达载体 pET-28a中，构建 Cp735基 因的重组原核表达 裁体 pET28aCp735。将 pET28a—Cp735在大肠杆菌 BI21(DE3)中诱导表达，并用 SDS—PAGE和Westernblot进行 鉴定 。结果表 明 ：得 到 了在大肠杆菌 中高效表达 的重组蛋 白，分 子质量大小约为 26kD，并且具有反应原性。 关键词 ：微小 隐孢子 虫；Cp735基 因；克隆；原核表达 中图分类号 ：$852．7；R38 文献标识码 ：A 文章编号 ：1000—5684(2011)05．0567—04 DOI：CNKI：22—1l00／S0929．002 网络 出版地址 ：hnp：／／www．cnki．net／kcms／detail／22．1100．S0929．002．html 引文格式 ：范大为 ，肖丹 ，张西 臣，等 ．微小 隐孢子虫cp735基 因的克 隆及原核表达 [J]．吉林农业大学学报 ， 201l，33(5)：567—570． Cloningand ProkaryoticExpression ofCp735GeneofCryptosporidium parvum FAN Da—wei，XIAO Dan，ZHANG Xi—chen，GONG Peng—tao，YANG Ju，LIJian—hua CollegeofAnimalScienceandVeterinaryMedicine，JilinUniversity，Changchun130062，China Abstract：TheCp735genewasamplifiedbyPCR．CodingsequenceidentifiedbyDNA sequencingwas cloned into the expression vectorpET一28a to constructprokaryotic expression vector．Therecombinant proteinwasexpressedinBL21(DE3)．TheresultofSDS—PAGE showedthatthemolecularweightof theexpressedproductwasidenticaltothatofprediction．Th eresultofWesternblotdemonstratedthatthe expressed protein had reactogenicity． Keywords：Cryptosporidium parvum；Cp735gene；cloning；prokaryoticexpression 微小隐孢 子虫是一种机会致病原虫 ，可寄生 意的保护效果。因此寻找理想 的疫苗候选基因， 在包括人在 内的多种哺乳动物的小肠或者结肠上 了解候选靶抗原 的功 能和结构 ，通过免疫干预阻 皮细胞 内。通常患者 以急 、慢性腹泻为主要症状 ， 断微 小 隐孢 子 虫对 宿 主上 皮 细胞 的附着 和 侵 但是有免疫缺陷的人群尤其是艾滋病患者生命将 入l9。l_是治疗 和预防的有效途 径 。Cp735基因是 受到威胁_】卫j。世界卫生组织和美国疾病 预防控 从吉林大学畜牧兽医学院动物寄生虫与寄生虫病 制中心已将该病列入新发传染病 ，至今临床上 尚