黄瓜6-磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因cDNA片段的克隆及表达分析.pdfVIP

南京农业大学学报 2010，33 (1)：37 42 Jo~rualo厂Na．jingAgriculturalUniversity 魏跃，陈啸寅，李振陆，等．黄瓜6一磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因cDNA片-衩Jt的克隆及表达分析 [J]．南京农业大学学报，2010，33(1)：37—42 黄瓜 6一磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因cDNA片段的 克隆及表达分析 魏跃 一，陈啸寅 ，李振陆 ，王永平 ，史建磊 ，吴志明 ，张蜀宁 ，陈劲枫 (1．南京农业大学农业部南方蔬菜遗传改良重点开放实验室，江苏 南京 210095； 2．江苏农林职业技术学院，江苏 镇江 212400) 摘要：以黄瓜品种露丰为材料，根据 已报道的6 磷酸葡萄糖酸脱氢酶基因 (6PGDH)的保守氨基酸序列设计简并引物， 利用RT—PCR技术获得黄瓜 6PGDH的cDNA同源片段 ，命名为CSPG (登录号为EU815934) 该片段长度为1207bp，包 含一个936bp的开放阅读框 (编码 311个氨基酸)和271bp的PolyA3非翻译区末端，无 内含子；该基闪编码的氨基 酸序列 拟南芥 、大豆、水稻、玉米、菠菜的6PGDH基因有75％以上的同源性。运用半定量 RT—PCR技术对6PGDH基 因的转录水平进行分析，结果表明：该基因在叶、根、茎中均有表达，高温胁迫下的表达量高于常温对照，说明6PGDH 基因与热胁迫相关。 关键词：黄瓜；6 磷酸葡萄糖酸脱氢酶；eDNA；克隆 中图分类号：$642．2 文献标志码 ：A 文章编号：1000—2030 (2010) )【l一0037—06 Cloningof6-ph0sph0gluc0natedehydrogenasegeneeDNA fragmentsfrom cucumberandexpressionanalysis WEIYue，CHENXiao—yin ，LIZhen—lu ，WANGYong—ping ，SHIJian—lei， WUZhi．uring，ZHANG Shu—ning，CHENJin．feng (1．KeyLaboratoryofSouthernVegetahleCropGeneticsImprovement，MinistryofAgriculture，NanjingAgricuhural University，Nanjing210095，China；2．JiangsuPolyteehniealCollegeotAgricultureandForestry，Zhenjiang212400，China) Abstract：Withhomology—basedPCRstrategy，afragmenteDNAnanledCSPG (accessionnumberEU815934)wasclonedrfom Cucumissativus l‘~ufeng’．ThelengthofCSPGwas1207bp，whichencompassedanopenreadingrfame(ORF)with936hp encoding311aminoacidresiduesand271bpnon—translation3 terminalendregion，andnointronexistedinCSPG．Theprotein encodedbyCSPGwasnlorethan75％ highlyhomologous6-phosph0g1uconatedeh)rdrogenasegene (6PGDH)ofArabidopsisthali一 (Hla，Glycinemax，Oryzasativa，Zeamays， inaciaoleracea．Theexpressionof6PGDH wasanalyzedbysemi—quantitativeRT— PCR indicatingthaithegenehadexpression inleaf，rootandstein，andthattheamountofexpressionwashigherinheatstressthan normaltemperature．Whichshowedthatexpressionof6PGDH wasrelatedtoheatstress． Keywords