采用腺病毒作为猪用疫苗的研究进展载体.pdfVIP

专论与综述 采用腺病毒作为 猪用疫苗的研究进展载体 智海东 (中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 。哈尔滨 150001) DO1：10．3969／J．ISSN．1671-6027．2012．03．002 疫苗是兽医学中最有效和最便宜的预防工具。现实的兽 为兽用疫苗有许多优点 ：(1)它们可以感染很大一类分裂或 医领域不仅理想的疫苗很少，许多疫苗效力有限或有毒副效 非分裂细胞；(2)Ad感染随处可见 ，通常并不引起显著或严 应，而且仍有一些严重疾病尚无有效疫苗。传统的疫苗包括 重地临床症状；(3)它们可经 口服接种 ；(4)对Ads的基因 灭活疫苗 、弱毒疫苗和亚单位疫苗。近期已采用基因工程技 组已研究 的很明确；(5)它们可容纳36kb的外源基因；(6) 术改进和设计新型疫苗。腺病毒可诱导抗插入外源基因编码 它们的基因组很少整合入宿主染色体 ；(7)现在构建rAd载 抗原的体液、黏膜和细胞免疫应答，现已成为表达和运送外 体的技术已很成熟 ；(8)它们可在互补细胞系上复制 ，并达 源免疫蛋白的候选载体之一，用于开发各种动物的疫苗 ，尤 到很高的滴度。 其是猪用的载体疫苗。本文总结了作为猪用载体疫苗的研究 2 Ad生物学 进展以及腺病毒载体的生产和纯化进展与策略。 Ad是60～90nm无囊膜的20面体病毒 ，有大约36kb的 1 引 言 线性双链 DNA基因组。根据病毒染色体基因组复制的前后， 传统免疫使用的疫苗灭活疫苗 、弱毒疫苗或亚单位疫 可将其基因组分为早期 (E)和晚期 (L)表达基因。E1基因产 苗。灭活疫苗也称 “死苗”，含有处理过不能复制的微生物，它 物涉及控制病毒基因的转录，关闭细胞蛋白和细胞转化。E2 们不能在细胞质 中刺激蛋 白产生 ，因此病毒抗原不能被 基因编码的蛋白涉及病毒复制，包括涉及 DNA延长的 1个 MHC—I类分子呈递 ，不能产生细胞毒性CD“T细胞。弱毒疫 DNA结合蛋 白(E2A)和 1个 DNA聚合酶 (E2B)；E3基因对 苗在诱导包括细胞毒性 CD T细胞在内很大数量的相关效 Ad的复制必不可少 ，编码干扰宿主抗病毒感染免疫应答的 应机制方面通常效力较高 ，但弱毒疫苗有时有残余毒力，或 蛋白；最后E4基因涉及由早期到晚期基因表达的转换，关闭 通过突变成为有致病性的毒株重新出现。亚单位疫苗本身要 宿主细胞基因的表达 ，病毒复制并组装成病毒粒子。第一代 比依靠整个微生物制备的疫苗安全，但是它们的免疫原性不 载体通常缺失它们的E1和E3区，可是当在 293细胞生产 强 ，在诱导MHC—I类特异性应答上很困难。因此疫苗研发仍 时，在第一代 Ad载体的左末端与细胞基因组中与El基 因 是免疫学的一个重要 目标。目前还需要进一步改进现有疫苗 序列部分重叠的区域之间会发生重组 ，导致产生E1阳性复 的不足来减少疾病对动物生产的经济影响。 制全能的Ad(RCA)，如果想要非复制型载体这是一个重要 理想的疫苗应在预防感染中 100％有效 ，但现实并非如 的安全性问题。第二代载体是复制缺陷型Ad，进一步的缺失 此。一种疫苗应在单次接种后的数 日至几周 内能提供超过 了E2A、E2B或 E4，免疫原性和 RCA产生均下降，但是构建 90％的保护力，就是非常好的疫苗了。为了降低再免疫带来 与这些载体互补稳定细胞系的操作非常繁琐，导致细胞生长 的成本 ，应该研制一种接种次数最少、免疫持续期最长的免 差病毒滴度低。 疫程序。多数病毒是通过黏膜表面入侵的，因此，通过黏膜途 rAd载体已被开发为复制全能型的载体 ，将外源抗