南瓜组织培养体系建立研究.pdfVIP

维普资讯 北方 园艺2005(3)：75—76 ·生物技术 · 南瓜组织培养体系建立研究 李 贞 霞，李 新 峥 ，董 卫 华2 (1．河南科技学院园艺系 ，新乡453003；2．河南省新乡医学院，新乡 453oo3) 摘 要：以黄狼南瓜种子为试材，用MS与不同激素配比的培养基，初步建立了南瓜离体培养再生体系。 实验结果表明：种子进行无茵萌发用0．1％的HgCI2溶液消毒时，消毒时间以9min(分钟)为宜；以0．8％琼 脂培养基上长出无茵苗的速度最快；培养基(MS+1．0mg／L(毫克／升)BA+1．0mg／L(毫克／升)NAA)是南 瓜愈伤组织诱导的最适培养基；刚转绿的南瓜子叶是诱导愈伤的最适外植体；培养基 (Ms+1．0mg／L(毫克／ 升)BA+0．05rag／L(毫克／升)NAA)是南瓜芽分化的最适培养基。 关键词：南瓜；组织培养；再生体系 中图分类号：$642，1 文献标识码：B 文章编号：1001—0009(2005)03—0075—02 南瓜(Cucurn／tamaschata)是葫芦科南瓜属的一年生蔓 及不同放置方式情况下愈伤组织的生长有何不同。 性草本植物。营养价值高。适应性广。用途多。耐贮运。目前 1．3．3 芽的分化 选择生长较好的愈伤组织作为进一步分 在我国南瓜的育种工作大多采用传统的育种手段。在本实验 化培养的材料，将其切成体积约为0．5cm (立方厘米)左右的 中我们对南瓜的组织培养体系的建立进行了探讨，其重要意 切块并转入芽分化培养基中进行培养，每两周更换一次培养 义有二个方面，一是为南瓜进行分子育种奠定组培基础；二是 基，按时观察愈伤分化情况。 为一些名优南瓜品种的快速繁育奠定基础。 2 结果与分析 1 实验材料与方法 2．1 消毒时间对种子无菌萌发的影响 1．1 供试材料与培养条件 无菌萌发是植物组织培养中最基础的环节，因此材料的 黄狼南瓜种子。基本培养基为MS中加入琼脂0．6％、蔗 灭菌效果和出苗情况直接影响实验的进程。本实验采用 糖 3％、pH5．8。培养室温度 25±1℃(度)，8h(小时)黑暗， 7O％的酒精和0．1％的HgCl2溶液作为种子无菌萌发的消毒 12h(小时)光照。 液，其对种子萌发的影响如下。 1．2 培养基 表 1 HgCl2消毒时间对种子无菌萌发的影响 MS；1／2MS(在MS培养基的基础上，大量元素减半，其 它成分不变)；0．8％琼脂(每升培养基除加入 8g(克)琼脂外， 不添加其它任何成分)。 1．3 实验方法 1．3．1 无菌苗的获得 选取饱满、大小一致的黄狼南瓜种 子，去皮，在25℃(度)的恒温水中浸种 5h～6h(小时)。后 用70％的酒精表面消毒30s(秒)，置0．1％的HgCl2溶液中 从表 1可以看出：消毒效果与消毒时间的长短有很大关 分别消毒 5min、7min、9min、11min(分钟)l【J，观察不同消毒 系。当消毒时间为5min(分钟)时污染率高达35．6％，随着 时间对无菌苗萌发的影响。消毒期间要不停摇动，然后用无 消毒时间的延长，消毒效果越来越好。但时间过长，容易对种 菌水冲洗 4～5次。种子消毒之后在无菌条件下将其胚根部 子造成毒害，降低种子的萌芽率。从表中可以看出当消毒时 分分别插入无菌苗萌发培养基上培养。 间为11mm(分钟)时，污染率为0，可萌芽率与9min(分钟) 1．3．2 愈伤组织的诱导 在无菌苗子叶刚转绿时取其子叶、 时相 比降低了13．3％。因此，在对南瓜种子消毒时，消毒时 下胚轴、胚根傲外植体诱导愈伤组织。在取用子叶时，去掉子 间以9r