低压段DHPM作用对木瓜蛋白酶结构影响的荧光光谱分析.pdfVIP

第30卷，第2期 光谱学与光谱分析 2010年2月 and SpectroscopySpectralAnalysis February，2010 低压段DHPM作用对木瓜蛋白酶结构影响的荧光光谱分析 刘 伟，谢明勇’，钟业俊，刘成梅，官 斌，王 倩 南昌大学食品科学与技术国家重点实验室，江西南昌330047 摘要以荧光光谱为检测手段研究了低压段(60～100MPa)动态高压微射流作用(DHPM)对木瓜蛋白酶 (Papain)分子结构的影响。结果显示，在60～100 光强度均有不同程度降低，且随着处理压力的增加，Papain，Tyr残基和Trp残基的荧光强度逐渐增大， Papain，Trp残基荧光发射峰的位置分别从未处理时的334和277．5rllTl逐渐红移至100MPa处理后的335 和278．5rim；在o～4℃放置24 h后，Papain，Tyr残基和Trp残基的荧光光谱均基本保持了0h时的变化 趋势。表明低压DHPM处理后，Papain中Trp残基逐渐暴露出来，并形成了较为稳定的新分子构象。 关键词动态高压微射流作用；低压段；木瓜蛋白酶；荧光光谱 中图分类号：0433．4文献标识码：A 程度暴露于溶剂中，部分二硫键发生断裂后形成新的巯 引 言 基㈨。 本课题组采用低压段(60～100 木瓜蛋白酶通过水解蛋白质分子内部肽链而生成分子量 处理时发现，随着处理压力增加，Papain酶活逐渐下降，在 较小的多肽类，在生物医药和食品化工等领域具有广阔的商 O～4℃下放置24h后酶活基本不变，这种酶活变化与其结 业应用。Papain是一种巯基单体蛋白酶，由212个氨基酸残 构变化存在何种相关性，为探索这一作用机理，本实验以荧 基组成，含有19个Tyr残基、5个Trp残基、4个Phe残 光光谱为分析手段研究DHPM对木瓜蛋白酶结构的影响， 基LlJ。荧光光谱法是研究酶分子构象的一种有效方法，它能 为揭示DHPM对木瓜蛋白酶的酶学性质与分子结构之间的 提供包括激发光谱、发射光谱以及荧光强度等物理参数，这 影响规律奠定基础。 些参数从各个角度反映了分子的成键和结构情况，以及酶分 子在各种环境下的构象变化，从而阐明结构与功能之间的关 1材料与方法 系[2]。近年来，利用荧光光谱分析技术对酶的酶学性质和结 构的影响方兴未艾，何平等【3J利用紫外吸收光谱、荧光发射 1．1材料 光谱研究了二甲基哑砜对木瓜蛋白酶活性与构象的影响；曾 木瓜蛋白酶：酶活(干酪素，pH 新安等[41采用荧光光谱研究r脉冲电场对木瓜蛋白酶的影mg)≥6 响。 用化学试剂均为分析纯。 mierofluidi- 动态高压微射流作用(dynamichighpressure 1．2动态高压微射流处理 mol·L-1 zation，DHPM)是一种新兴的高压技术，其骶力叮达180用0．05mol·L-1半胱氨酸、0．035EDTA二 MPa，通过高速撞击、高速剪切、高频震荡、瞬间压降、空穴 钠盐、0．05 mol·L～pH6．0磷酸缓冲液配制酶液，酶液浓 作用等机械作用可实现对生物大分子的改性[5-s]。本课题组度为1mg·mL～，采用廊坊通用机械有限公司生产的NCJJ 在前期t作中研究了动态高压微射流作用对早酥梨中多酚氧 化酶酶学