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RNA 提取的流毒非浅的经典误区（RNA 提取的实践指南） 最近碰到了好几个RNA 提取的初学者来实验室学习如何提取RNA，对于如此简单的操 作，却有如此多的人提取不出来，细问一下，原来他们的知识来源都是书本上或者网上 的“RNA 提取注意事项一类” 的所谓经验，其实，他们提取不出来的真正原因，恰恰是他 们严格遵守了所谓的经验，精力全放在不需要注意的地方，结果搞得自己很紧张， 真正 需要注意的操作反而没有注意了。下面我就结合常见的RNA 操作注意事项与实验技巧 的文章指出提取RNA 的流毒非浅的常见误区： 1．“ 如果可能，实验室应辟出专门RNA 操作区，离心机、移液器、试剂等均应专用。 RNA 操作区应保持清洁，并定期进行消毒。” 完全错误，任何普通的试验台，不需要任何消毒，暴露在空气中就可以。用我的话说就 是垃圾堆里面我都可以提取出RNA!有的学生告诉我他们在哪里提取的， 他们在超净台 里面操作，只有两个孔伸手进去，操作及其不便，还容易使人疲劳，风干RNA 沉淀的时 候，也看不清楚，常常造成要么干过头，要么乙醇残留高。空气中有RNA 酶污染，还到 处乱飘，还会到离心管子里面降解RNA,谁告诉你的？你看见了？你做过实验了？人家 说啥你就信？如果真是这样空气到处飘RNA 酶，你的电泳槽，电泳仪，电泳液总不可能 放到超净台电泳吧？你配制电泳缓冲液总不能不暴露在空气中吧？电泳液体，电泳槽不 知道早就被飘进多少RNA 酶了，那还怎么跑电泳，全部降解！可能嘛？更何况超净台空 气净化过滤的是细菌大东西，RNA 酶蛋白分子那么小它能过滤得掉嘛，所以如果空气中 有RNA 酶，超净台也挡不住的。稍微分析一下就明白了。实际上，随便啥普通实验室的 试验台提取RNA，几百次了，从未因为没有在超净台提取就降解RNA 的。 2 ．“操作过程中应自始至终佩戴抛弃式橡胶或乳胶手套，并经常更换，以避免将手、臂 上的细菌和真菌以及人体自身分泌的RNA 酶带入试管或污染用具。尽量避免使用抛弃式 塑料手套。塑料手套不贴身，常常造成操作不便，而且多出部分还容易在器具上遭RNA 酶污染并向未污染处传递，扩大污染。 这是流传最广的错误，因为手上的RNA 酶，按照正常的操作，怎么可能带到离心管里面？ 即使沾到离心管壁外面了，对里面的RNA 也完全没有影响啊。难道你是崂山道士，不带 手套抓住离心管子，手上RNA 酶可以透过塑料管穿墙过去降解RNA?如果你有这个本事， 塑料管子都可以穿透，再戴个手套那不也可以穿透？如果说你不戴手套，你手上的RNA 酶多到可以随时掉下来，掉渣，掉到离心管子里面。那不是提取RNA 的问题，那是卫生 问题，你该洗手或者洗澡了。除非有人参观，我一般提取RNA 根本不注意是否带了手套， 戴手套也是为了保护手不沾到苯酚，氯仿。 而不是怕污染。至于扩大污染一说， 完全 是胡扯，试验台上早就到处是飞沫，手接触后留下的RNA 酶，早就污染完全了，再说， 还是我刚才说的，它们怎么可能转到小离心管里面？ 3．研钵去干烤。 不需要，洗干净，晾干就可以了，即使里面有一些RNA 酶残留，有液氮的时候如此低的 温度下怎么可能降解RNA，转到裂解液后，外源，内源的RNA 酶就会被全部抑制。何 况，组织里面那么多的内源性RNA 酶研磨的时候都不会降解RNA，残留一点在研钵上 的RNA 酶就会吗？实际操作，研钵洗干净（避免交叉污染就行），然后晾干，或者用纸 擦干就直接用了。残留一点不会影响。 4 ．操作时候戴口罩，帽子，不说话。 不需要， 除非你提取的时候唾沫横飞， 而且特别准确，有一滴飞入了你手上拿的1.5 毫升的离心管。总之，我边提取的时候，边要和学生大谈，提取RNA 如何如何的简单。 5．用DEPC 处理吸头， 小离心管。 不需要，国外的吸头，离心管散装的，装好在吸头盒里面 ，直接可以用，不需要高压灭 菌。国产的我用得不多， 反正我买过浙江产的2 分钱一个的离心管，照样不需要DEPC 处理，不需要高压，打开了，直接用。总之做不出来， 首先千万不要找吸头，离心管是 国产质量不好的原因。道理很简单，高温高压生产线的塑料管子早就经历了几百度高温 的融浆状态，早就RNA 酶灭活干净了。退一万步，即使污染了RNA 酶，至少和裂解液 接触的吸头离心管子全部不用处理吧？。举个例子，如果用一个污染了RNA 酶的吸头去 吸取裂解液，会发生下面哪种情况：1.吸头把RNA 提取裂解液污染了。2.裂解液把吸头 RNA 酶给灭活了。想想内源性提取的细胞的那么多RNA 都可以被裂解液灭活好好的。 吸头一点污染能不灭活？ 北京瑞金特生物科技有限公司 代理