香蕉谷氨酸脱羧酶基因克隆与表达.pdfVIP

西北植物 学报 ，2009，29(3)：0429～0434 ActaBot．Borea1．-Occident．Sin． 文章编号 ：1000—4025(2009)03—0429—06 香蕉谷氨酸脱羧酶基因克隆与表达 胡 伟 ，杨晓颖 ，李美英 。，王 卓 ，徐碧玉 。，金志强 。 (1中国热带农业科学院 热带生物技术研究所 ，海 口571101；2海南大学 农学院，海口571101；3农业部热带生物技术重点开放 实验室 ，海 口571101；4中国热带农业科学 院 海 口实验站 ，海 口57l101) 摘 要 ：根据抑制缩减杂交文库获得的香蕉谷氨酸脱羧酶基 因片段 ，利用 RACE技术 ，首次从香蕉果实中克隆了谷 氨酸脱羧酶基因的cDNA全长 。结果表 明，该 cDNA 的ORF全长 1500bp，编码 499个氨基酸。Blast分析表 明， 该基因所推导的氨基酸序列与水稻 、柑橘 、白杨 、番茄等具有较高的一致性 ，分别为82 、81 、79 、78％，推测其 编码 的蛋白质分子量为 56．25kD，等电点 5．21，具有与钙调蛋白结合 的c端延伸区域和磷酸吡哆醛结合位点。组 织特异性和果实采后正常成熟不同阶段表达结果显示 ，该基 因在香蕉根 、茎 、叶、花 、果实 中均有表达，果实中的表 达量较高，正常成熟表达量 的增加可能受 内源 乙烯诱导并促进 乙烯生物合成 ，推测其可能在不 同的生理过程 中起 作用 ，并且与果实成熟及乙烯生物合成密切相关 。 关键词 ：香蕉 ；谷氨酸脱羧酶 ；克隆；表达分析 ；实时定量 PCR 中图分类号 ：Q789 文献标识码 ：A CloningandExpressionAnalysisofM aGAD1Genefrom BananaFruit HU W ei】～，YANG Xiao—ying 。，LIM ei—ying～，WANG Zhuo ， XU Bi—yu ，JIN Zhiqiang’。’ (1InstituteofTropicalBioscienceandBiotechnology，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalScience；2DepartmentofAgricul ture，HainanUniversity，Haikou571101，China；3KeyIaboratoryofTropicalCropBiotechnology，M inistryofAgricuhrue，Haik on571101，China；4HaikouExperimentalStation，ChineseAcademyofTropicalAgriculturalScience，Haikou571101，China) Abstract：TheGAD genewasisolatedfrom bananafruit(M usaacuminataL．AAA groupCV．Brazilian)and designatedasMaGAD1．ThefulllengthofMaGAD1cDNA is1500bpwithanopenreadingframeenco— ding499am inoacidsthatsharedhighidentitieswiththeGAD from Oryzasativa，Citrussinensis，Populus albaandSolanumZycopersicum (82 ，81 ，79 and78％)．AminoacidalignmentindicatedMaGAD1has aCaM bindingdomainatthecarboxyterm inusandaputativePLP—bindingmotif．RT—PCR analysisshowed thatM aGAD1iSexpressed in roots，stems，Ieaves，flowersand fruits．Theexpression IeveriShigherin fruitsthaninotherorgans．RealtimequantitativeRT—PCR analysisandmeasureofethyleneproductionin— dicatedthatthe