伏马菌素B_1人工抗原的合成及鼠源多克隆抗血清的制备.pdfVIP

核 农 学 报 2012，26(1)：0113—0ll7 1l3 JournalofNuclearAgriculturalSciences 文章编号 ：1000—8551(2012)O143113435 伏马菌素 B 人工抗原的合成及 鼠源 多克隆抗血清的制备 王 耀 胡骁飞 裴亚峰 张小辉 龚 芳 侯玉泽 张改平 邓瑞广 (1．河南省农业科学 院／农业部动物免疫学重点实验室／河南省动物免疫学重点实验室 ，河南 郑州 450002； 2．河南科技大学食品与生物工程学 院，河南 洛阳 471003) 摘 要：本研 究合成并鉴定伏马菌素 B (FB )人工抗原 ，通过动物免疫制备敏感性高、特异性好 的鼠源 FB，多克隆抗血清。采用碳二亚胺 (EDC)法将 FB 分别与载体蛋 白BSA和 OVA偶联 ，合成免疫抗原 FB1一BSA和检测抗原 FB。一OVA，经鉴定后 ，分别按 l0和30 g／只的剂量免疫 BALB／c小 鼠，共免疫4次， 每次间隔3周，最后 1次免疫30d后 ，断尾采血 ，制备 多抗血清。利用间接 ELISA方法测定抗血清效价 ， 间接竞争 ELISA测定敏感性和特异性。结果表明，免疫的6只小鼠效价均达 1：10 以上，3号小鼠多抗 血清敏感性最好 ，半数抑制浓度 Ic。为61．3ng／ml，且具有 良好的特异性。本试验成功合成 了FB。人工 抗原，并制备 了敏感性高、特异性好的鼠源多克隆抗体血清 ，为 FB．单克隆抗体制备及其免疫学快速检 测方法的建立奠定了基础 。 关键词：伏马菌素 B ；人工抗原；多抗血清；ELISA PREPARATION OF FUM ONISIN BlARTIFICIAL ANTIGEN AND M OUSE POLYCLONAL ANTISERUM WANG Yao一 HU Xiao．fei PEIYa．feng ZHANG Xiao—hui GONG Fang HOU Yu—ze。 ZHANG Gai．ping DENF Rui．guang (1．HenanAcademyofAgriculturalSciences~KeyLaboratoryforAnimalImmunology，Ministry ofAgriculture／HenanKeyLaboratoryofAnimalImmunology，Zhengzhou，Henan450002； 2．FoodandBioengineeringCollege，HenanUniversityofScienceandTechnology，Luoyang，Henan 471003) Abstract：Topreparehighsensibilityandspecificitypolyclonalantiserum againstFBl，FumonisinBl(FB1)artificial antigensweresynthesizedandidentifiedthroughanimalimmuneinthisstudy．FB1wereseparatelycoupledwithcarrier proteinBSA andOVA usingEDC method，thentheimmuneantigenFBl—BSA anddetectionantigen FBl—OVA were obtained．TheBALB／cmicewererespectivelyimmuneatthedoseof10 and3O g，everyfourweeks，fourtimesin tota1．Atthethirtydaysafterthelastimmunity，thepoly—antiserum waspreparedthroughbroke